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目的:采用系统药理学及蛋白质组学方法研究补肾方治疗阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的机制。方法:1 研究一:以 AD 患者,遗忘型轻度认知损害(Amnestic mild cognitive impairment,aMCI)患者和正常对照(Normal control,NC)为研究对象,采集空腹血浆,采用非标记蛋白质组学技术获得差异蛋白结果,选定目标蛋白。扩大样本量,运用ELISA试剂盒测定已选定的目标蛋白浓度,比较三组间目标蛋白浓度差异,分析认知功能量表与目标蛋白的相关性,采用接收者操作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)分析目标蛋白对阿尔茨海默病的识别能力。2研究二:以中药系统药理学数据库和分析平台TCMSP为基础,搜集补肾方十味中药的主要单体成分,应用基于云计算的一体化生物通路分析软件(Ingenuity Pathway Analysis,IPA)在线数据库软件构建药物的靶标网络(Protein-protein interaction,PPI),分析其所有生物学功能,从而得出补肾方生物学作用的前10个主要功能,总结出补肾方治疗阿尔茨海默病的干预靶点。结果:1在2.0差异倍数(FC=fold change)阈值条件下,进行差异蛋白筛选。AD组和NC组比较上调66个,下调9个;AD组和aMCI组比较上调46个蛋白,下调8个蛋白;aMCI组和NC组比较上调29个,下调14个。初步筛选蛋白肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α),转化生长因子 β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1),超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase[Cu-Zn],SOD1)和软骨酸性蛋白 1(Cartilage acidic protein 1,CRTAC1)为目标蛋白。2 AD 组血浆 TNF-α、TGF-β1、SOD1 浓度显著低于 aMCI 组和 NC 组(P<0.01),aMCI组和NC组无显著差异(P=0.357,P =0.758,P =0.678)。AD组血浆CRTAC1浓度显著低于 aMCI 组(P<0.01)。3血浆TNF-α、TGF-β1、SOD1和CRTAC1浓度和简易精神状态检查(Mini-Mental State Examination,MMSE)评分呈正相关,与临床痴呆评定量表(Clinical Dementia Rating,CDR)评分呈负相关(P<0.01)。4 4个目标蛋白中,血浆TNF-α浓度区分AD和aMCI的敏感度和特异度分别为80%,80%(AUC=0.845,P<0.01);区分AD和NC的敏感度和特异度分别为75%,80%(AUC=0.821,P<0.01);区分痴呆和非痴呆的敏感度和特异度分别为77%,80%(AUC=0.833,P<0.01)。血浆TGF-β1浓度区分AD和aMCI的敏感度和特异度分别为55%,85%(AUC=0.687,P=0.019);区分AD和NC的敏感度和特异度分别为55%,85%(AUC=0.692,P=0.017);区分痴呆和非痴呆的敏感度和特异度分别为 55%,85%(AUC=0.689,P=0.004)。血浆 SOD1 浓度区分 AD 和 aMCI 的敏感度和特异度分别为75%,77%(AUC=0.779,P<0.01);区分AD和NC的敏感度和特异度分别为85%,59%(AUC=0.740,P<0.01);其区分AD和非痴呆的敏感度和特异度分别为75%,69%(AUC=0.760,P<0.01);血浆CRTAC1浓度区分AD和aMCI的敏感度和特异度分别为80%,62%(AUC=0.760,P<0.01);区分AD和NC的敏感度和特异度分别为75%,51%(AUC=0.642,P=0.075);区分AD和非痴呆的敏感度和特异度分别为83%,51%(AUC=0.701,P<0.01)。5补肾方活性药物分子可能的作用通路是:神经炎症信号通路,内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)信号通路、糖皮质激素受体信号,内皮素1信号,整合素连接激酶。6 TGF-β1可能是补肾方活性药物成分的作用靶标。结论:1 AD患者血浆TNF-α、TGF-β1和SOD1浓度较非痴呆组明显降低,且与痴呆的严重程度相关。2血浆TNF-α、TGF-β1和SOD1浓度均可用于AD和非痴呆的鉴别。3补肾方治疗AD可能是通过神经炎症通路发挥作用,TGF-β1是可能的作用靶点。