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依据毕赤酵母偏好密码子，设计合成长效人胰岛素原（human proinsulin，HPI）基因序列，所合成的HPI基因全长为200bp，并在其N端添加信号肽（EEAEAEAEPK）以提高目的蛋白表达．将改造后基因克隆到pPIC9K载体中，构建分泌表达型载体pPIC9K—HPI，转化到毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中．用遗传霉素G418梯度筛选获得高拷贝菌株，在甲醇诱导下表达分子质量为7．87ku的HPI，利用金属螯合层析纯化蛋白质，胰蛋白酶酶切后利用人胰岛素试剂盒测得生物活性，HPI