【摘 要】
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目的 研究新生儿败血症患儿外周血CD4+T细胞微小RNA-146a-3p (miR-146a-3p)、白细胞介素17(IL-17)的表达及机制.方法 应用实时定量PCR检测66例败血症患儿、40例感染性疾病患儿及40例健康新生儿(对照组)CD4+T细胞miR-146a-3p、IL-17 mRNA的表达,ELISA检测外周血IL-17水平.双荧光素酶报告实验验证miR-146a-3p对IL-17的靶向作用关系.分离CD4+T细胞,采用miR-146a-3p模拟物(miR-146a-3pmimic)或miR-
【机 构】
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右江民族医学院附属医院新生儿科,广西百色533000;右江民族医学院附属医院检验科,广西百色533000
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目的 研究新生儿败血症患儿外周血CD4+T细胞微小RNA-146a-3p (miR-146a-3p)、白细胞介素17(IL-17)的表达及机制.方法 应用实时定量PCR检测66例败血症患儿、40例感染性疾病患儿及40例健康新生儿(对照组)CD4+T细胞miR-146a-3p、IL-17 mRNA的表达,ELISA检测外周血IL-17水平.双荧光素酶报告实验验证miR-146a-3p对IL-17的靶向作用关系.分离CD4+T细胞,采用miR-146a-3p模拟物(miR-146a-3pmimic)或miR-146a-3p抑制物(miR-146a-3p inhibitor)促进或抑制CD4+T细胞miR-146a-3p表达后,流式细胞术检测Th17细胞比例变化,甲基化特异PCR检测miR-146a-3p基因甲基化情况.CD4+T细胞中加入甲基化抑制剂5-氮杂-2\'-脱氧胞嘧啶(5-Aza-dC)后,观察Th17细胞比例变化及IL-17表达变化.结果 与感染性疾病患儿及对照组相比,败血症组患儿外周血CD4+T细胞miR-146a-3p表达降低,IL-17 mRNA水平增加,外周血IL-17水平升高.CD4+T细胞中转染miR-146a-3pmimic能够显著抑制IL-173 \'非翻译区(3\'UTR)野生型的荧光素酶活性.转染miR-146a-3p mimic后,CD4+T细胞IL-17 mRNA显著降低,培养上清中IL-17水平和Th17细胞比例显著降低,而转染miR-146a-3p inhibitor后,IL-17 mRNA表达显著升高,上清中IL-17水平显著升高,Th17细胞比例升高.败血症组外周血miR-146a-3p基因启动子甲基化阳性率明显高于对照组及感染组,CD4+T细胞中加入5-Aza-dC后,miR-146a-3p表达升高,IL-17 mRNA表达降低,上清中IL-17水平降低,Th17细胞比例明显降低.结论 新生儿败血症患儿外周血CD4+T细胞miR-146a-3p表达下调,IL-17表达上调.
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