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摘 要：本文对芪芍抗毒颗粒中黄芪甲苷的提取工艺进行研究。最佳提取工艺为提取3次，第一次加入10倍量蒸馏水，提取1小时，第二次加入10倍量蒸馏水提取1小时，第三次加入10倍量蒸馏水提取1小时，浓缩。本方法可靠、简单，可用于生产。
关键词：芪芍抗毒颗粒；工艺；研究
黄芪为芪芍抗毒颗粒主要成分之一。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，近几年来野生黄芪的数量急剧减少，为此确定该植物为渐危种，国家三级保护植物[1-3]。黄芪用于治疗气虚乏力，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等。现代医学研究表明，黄芪含皂甙、甜菜碱、胆碱、叶酸、多糖、蔗糖、多种氨基酸等多种微量元素，促进蛋白质代谢，降血糖，改善肾功能，能消除实验性肾炎蛋白尿，增强心肌收缩力，调节血糖含量。本文对芪芍抗毒颗粒中黄芪甲苷提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
Temp 300双通道热电偶式温度计（塞默飞世尔科技水质分析仪器）； HP系列无油真空泵（天津市恒奥科技发展有限公司）；R-210瑞士步琦旋转蒸发器（上海沃珑仪器有限公司）；HN-6AL汗诺功率可调超声波清洗（上海汗诺仪器有限公司）；Cascada III.I全新智能纯水/超纯水一体化系统（颇尔过滤器（北京）有限公司）；英国艾德姆PWC分析天平（艾德姆衡器（武汉）有限公司）；天瑞仪器LC-310液相色谱（江苏天瑞仪器股份有限公司）。乙腈（上海埃彼化学试剂有限公司）、甲醇（上海埃彼化学试剂有限公司）、磷酸（上海埃彼化学试剂有限公司）、正丁醇（长沙江龙化工科技有限公司）、乙醇（上海埃彼化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 水提
按处方称取药材，粉碎为粗粉，至于圆底烧瓶内，分别加4倍、5倍、6倍、8倍、10倍水，浸泡0.5小时，提取二次，第一次2小时，第二次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.2 醇提
按处方称取药材，粉碎为粗粉，至于回流提取器内，分别加4倍、5倍、6倍、8倍、10倍60%乙醇，浸泡0.5小时，提取二次，第一次2小时，第二次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.3 渗滤
按处方称取药材，粉碎为粗粉，至于渗滤罐内，分别采用4倍、5倍、6倍、8倍、10倍60%乙醇进行渗漉，渗漉速度为每分钟1升，合并渗漉液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.4 浸泡
按處方称取药材，粉碎为粗粉，至于浸泡罐内，分别采用4倍、5倍、6倍、8倍、10倍60%乙醇浸泡8小时，合并浸泡液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.5 正交试验设计
实验结果表明，水提取工艺优于其他工艺。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
表1 大黄酚提取工艺因素水平表
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱为Waters SunFire C18液相色谱柱 （规格250×4.6mm，5um）；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，漂移管温度为105摄氏度；载气流速为3.0ml/min；放大倍数为2[4-5]。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不得低于2000。
3.2 供试品溶液的制备
取芪芍抗毒颗粒浓缩膏，精密称定，加20毫升水，超声5分钟，用水饱和过的正丁醇振摇提取四次，每次20毫升，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20毫升，弃去氨液，正丁醇层水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5毫升容量瓶，用甲醇定容，摇匀，过0.45μm的滤膜，即得。
3.3 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品约50mg，置10毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含黄芪甲苷0.5mg）。
3.4 标准曲线的制备
制备浓度为0.1mg·mL-1、0.2mg·mL-1、0.4mg·mL-1、0.6mg·mL-1、0.8mg·mL-1、1.0mg·mL-1、1.2mgomL-1、1.4mgomL-1、1.6mgomL-1、1.8mgomL-1、2.0mgomL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值的对数A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪甲苷对照品在0.1～2.0mg·mL-1范围内线性关系良好。
3.5 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的黄芪甲苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为98.3%，RSD为0.92%。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为提取3次，第一次加入10倍量蒸馏水，提取1小时，第二次加入10倍量蒸馏水提取1小时，第三次加入10倍量蒸馏水提取1小时，浓缩。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]陈士林，魏建和，孙成忠，刘召芹，赵润怀，王继永，周应群，肖小河.中药材产地适宜性分析地理信息系统的开发及蒙古黄芪产地适宜性研究[J].世界科学技术，2006（03）.
[2]余坤子，刘靖，洪浩，郭宝林，蔡少青，陈虎彪.黄芪种植产地与生态环境及饮片规格的调查研究[J].中国中药杂志，2010（09）.
[3]索风梅，丁万隆，谢彩香，董粱，林余霖，孙成忠，李应东.蒙古黄芪的生态适宜性数值分析[J].世界科学技术（中医药现代化），2010（03）.
[4]高建，夏泉，黄赵刚，许杜娟，李俊.HPLC-ELSD同时测定当归补血总苷中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ[J].中成药，2012（02）.
[5]刘浩文，刘嘉仪，杨妙荣，陈建萍，王冬梅.黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究[J].中药新药与临床药理，2011（06）.
关键词：芪芍抗毒颗粒；工艺；研究
黄芪为芪芍抗毒颗粒主要成分之一。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，近几年来野生黄芪的数量急剧减少，为此确定该植物为渐危种，国家三级保护植物[1-3]。黄芪用于治疗气虚乏力，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等。现代医学研究表明，黄芪含皂甙、甜菜碱、胆碱、叶酸、多糖、蔗糖、多种氨基酸等多种微量元素，促进蛋白质代谢，降血糖，改善肾功能，能消除实验性肾炎蛋白尿，增强心肌收缩力，调节血糖含量。本文对芪芍抗毒颗粒中黄芪甲苷提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
Temp 300双通道热电偶式温度计（塞默飞世尔科技水质分析仪器）； HP系列无油真空泵（天津市恒奥科技发展有限公司）；R-210瑞士步琦旋转蒸发器（上海沃珑仪器有限公司）；HN-6AL汗诺功率可调超声波清洗（上海汗诺仪器有限公司）；Cascada III.I全新智能纯水/超纯水一体化系统（颇尔过滤器（北京）有限公司）；英国艾德姆PWC分析天平（艾德姆衡器（武汉）有限公司）；天瑞仪器LC-310液相色谱（江苏天瑞仪器股份有限公司）。乙腈（上海埃彼化学试剂有限公司）、甲醇（上海埃彼化学试剂有限公司）、磷酸（上海埃彼化学试剂有限公司）、正丁醇（长沙江龙化工科技有限公司）、乙醇（上海埃彼化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 水提
按处方称取药材，粉碎为粗粉，至于圆底烧瓶内，分别加4倍、5倍、6倍、8倍、10倍水，浸泡0.5小时，提取二次，第一次2小时，第二次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.2 醇提
按处方称取药材，粉碎为粗粉，至于回流提取器内，分别加4倍、5倍、6倍、8倍、10倍60%乙醇，浸泡0.5小时，提取二次，第一次2小时，第二次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.3 渗滤
按处方称取药材，粉碎为粗粉，至于渗滤罐内，分别采用4倍、5倍、6倍、8倍、10倍60%乙醇进行渗漉，渗漉速度为每分钟1升，合并渗漉液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.4 浸泡
按處方称取药材，粉碎为粗粉，至于浸泡罐内，分别采用4倍、5倍、6倍、8倍、10倍60%乙醇浸泡8小时，合并浸泡液，减压浓缩至相对密度为1.20（70摄氏度测）。采用高效液相测定浓缩膏含量。
2.5 正交试验设计
实验结果表明，水提取工艺优于其他工艺。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
表1 大黄酚提取工艺因素水平表
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱为Waters SunFire C18液相色谱柱 （规格250×4.6mm，5um）；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，漂移管温度为105摄氏度；载气流速为3.0ml/min；放大倍数为2[4-5]。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不得低于2000。
3.2 供试品溶液的制备
取芪芍抗毒颗粒浓缩膏，精密称定，加20毫升水，超声5分钟，用水饱和过的正丁醇振摇提取四次，每次20毫升，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20毫升，弃去氨液，正丁醇层水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5毫升容量瓶，用甲醇定容，摇匀，过0.45μm的滤膜，即得。
3.3 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品约50mg，置10毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含黄芪甲苷0.5mg）。
3.4 标准曲线的制备
制备浓度为0.1mg·mL-1、0.2mg·mL-1、0.4mg·mL-1、0.6mg·mL-1、0.8mg·mL-1、1.0mg·mL-1、1.2mgomL-1、1.4mgomL-1、1.6mgomL-1、1.8mgomL-1、2.0mgomL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值的对数A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪甲苷对照品在0.1～2.0mg·mL-1范围内线性关系良好。
3.5 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的黄芪甲苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为98.3%，RSD为0.92%。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为提取3次，第一次加入10倍量蒸馏水，提取1小时，第二次加入10倍量蒸馏水提取1小时，第三次加入10倍量蒸馏水提取1小时，浓缩。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]陈士林，魏建和，孙成忠，刘召芹，赵润怀，王继永，周应群，肖小河.中药材产地适宜性分析地理信息系统的开发及蒙古黄芪产地适宜性研究[J].世界科学技术，2006（03）.
[2]余坤子，刘靖，洪浩，郭宝林，蔡少青，陈虎彪.黄芪种植产地与生态环境及饮片规格的调查研究[J].中国中药杂志，2010（09）.
[3]索风梅，丁万隆，谢彩香，董粱，林余霖，孙成忠，李应东.蒙古黄芪的生态适宜性数值分析[J].世界科学技术（中医药现代化），2010（03）.
[4]高建，夏泉，黄赵刚，许杜娟，李俊.HPLC-ELSD同时测定当归补血总苷中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ[J].中成药，2012（02）.
[5]刘浩文，刘嘉仪，杨妙荣，陈建萍，王冬梅.黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究[J].中药新药与临床药理，2011（06）.