【摘 要】
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目的:构建适于原核表达的重组蛋白FasL表达载体,并进行重组蛋白的表达纯化及抗肿瘤活性分析。方法:获得人FasL cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得FasL基因。构建p
【机 构】
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厦门大学附属中山医院胃肠外科,厦门大学医学院抗癌中心
【基金项目】
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福建省自然科学基金资助(编号:C0710046)~~
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目的:构建适于原核表达的重组蛋白FasL表达载体,并进行重组蛋白的表达纯化及抗肿瘤活性分析。方法:获得人FasL cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得FasL基因。构建pGEX-5X-1/FasL表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST柱纯化。采用MTT比色法、流式细胞法检测融合蛋白对胃癌细胞的作用。结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因。表达的目的蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。MTT比色法与流式细胞技术均表明纯化的融合蛋白能抑制胃癌细胞株BGC823和MGC803的生长,诱导其调亡增加。结论:重组蛋白FasL表达载体的成功构建、表达、纯化及活性分析,为进一步的抗肿瘤功能研究奠定了基础。
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