【摘 要】
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目的研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导人晶状体上皮细胞移行及其信号通路机制。方法培养人晶状体上皮细胞,用不同浓度EGF处理24h后,Phagokinetic Track Mo
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目的研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导人晶状体上皮细胞移行及其信号通路机制。方法培养人晶状体上皮细胞,用不同浓度EGF处理24h后,Phagokinetic Track Motility分析细胞的移动性;EGF(100μg·L-1)孵育细胞不同时间后,Westernblot法检测磷酸化EGFR和AKT,并分别用PD153035(EGFR激酶抑制剂)和LY294002(PI3K/AKT抑制剂)预孵育细胞,观察上述指标;EGF(100μg·L-1)孵育细胞不同时间(12h、24h、48h)后,用酶谱法分析基质金属蛋白酶-2(matrix metallopreteinase-2,MMP-2),并用PD153035、LY294002预孵育细胞,检测MMP-2活性及细胞的移行。设立对照组,结果进行单因素方差分析,P<0.05表明差异有统计学意义。结果EGF可诱导培养人晶状体上皮细胞移行,并随浓度增加细胞的移动性有显著性提高;EGF可诱导EG-FR和AKT磷酸化,EGF处理后5min,EGFR和AKT的磷酸化达到峰值,作用可持续1h,EGFR抑制剂可阻断EGF诱导的AKT磷酸化;EGF可显著提高细胞中MMP-2的活性,并随时间延长活性增强,24～48h达到较高水平(1.4倍),PD153035、LY294002可抑制MMP-2的活性以及细胞的移行。结论在人工培养的人晶状体上皮细胞中,EGFR/PI3K/AKT通路介导了EGF刺激MMP-2的激活和体外培养人晶状体上皮细胞的移行,这一通路可被EGFR激酶抑制剂、PI3K/AKT抑制剂阻断,这些涉及的信号通路可能形成潜在的治疗后囊膜混浊的靶点。
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