【摘 要】
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目的构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,建立稳定干扰MEX3A基因表达的膀胱癌细胞株。方法采用实时PCR检测膀胱癌细胞株中MEX3A基因的表达;应用GV115质粒构建重组靶向MEX3A
【基金项目】
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国家自然科学基金(81371552)
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目的构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,建立稳定干扰MEX3A基因表达的膀胱癌细胞株。方法采用实时PCR检测膀胱癌细胞株中MEX3A基因的表达;应用GV115质粒构建重组靶向MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,鉴定及测序合格后,与包装载体共转染293T细胞产生慢病毒颗粒,病毒滴度测定后转染膀胱癌细胞,经抗生素筛选建立稳定表达si RNA的细胞株,实时PCR检测敲减效率。结果 MEX3A基因在膀胱癌5637和T24细胞中均有表达,且5637的表达量高于T24;鉴定及测序结果显示成功构建MEX3A-shRNA慢病毒载体,包装后病毒滴度较高,实时PCR结果表明慢病毒转染5637细胞后能稳定抑制MEX3A基因的表达。结论应用慢病毒介导的RNA干扰技术可成功建立稳定抑制MEX3A基因表达的细胞株。
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