【摘 要】
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目的 :通过在同一个表达载体pLX1上调整SD序列和ATG之间距离 ,以提高bFGF目的蛋白表达量。方法 :以Klenow和MungBeanNuclease通过增加 2个及减少 2个碱基调整SD序列和ATG之间
【机 构】
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解放军军需大学病毒研究所!吉林长春130021,吉林大学预防医学院,广州暨南大学生物工程研究所,吉林大学预防医学院,解放军军需大学病毒研究所!吉林长春130021
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目的 :通过在同一个表达载体pLX1上调整SD序列和ATG之间距离 ,以提高bFGF目的蛋白表达量。方法 :以Klenow和MungBeanNuclease通过增加 2个及减少 2个碱基调整SD序列和ATG之间距离 ,SDS PAGE和Westernblot检测目的蛋白表达量 ,以高压液相疏水层析、凝胶过滤及肝素亲和层析纯化目的蛋白、MTT法进行活性测定。结果 :获得了重组质粒pLX2 ,pLX3 ,诱导后与表达质粒pLX1( 7.78% )相比 ,表达量分别为 8.0 3 % ,9.9% ,经纯化后获得的bFGF纯度达 98% ,ED50 为 2 .2 9ng/ml。结论 :调整SD序列和ATG之间距离可以增加目的基因的剂量 ,从而提高了目的基因在大肠杆菌中的表达水平
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