【摘 要】
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目的 构建携带人肽酶抑制蛋白16(PI16)基因的重组腺病毒表达载体,并研究其在人主动脉瓣间质细胞(hAVICs)中的表达.方法 合成带有EcoRⅠ酶切位点的PI16引物,PCR扩增PI16基因,
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院心脏病科, 江苏省,210029
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目的 构建携带人肽酶抑制蛋白16(PI16)基因的重组腺病毒表达载体,并研究其在人主动脉瓣间质细胞(hAVICs)中的表达.方法 合成带有EcoRⅠ酶切位点的PI16引物,PCR扩增PI16基因,将目的基因克隆到穿梭载体pAV-MCMV-GFP-3FLAG中,PCR及测序鉴定穿梭质粒pAV-MCMV-PI16-GFP-3FLAG.将穿梭质粒与辅助质粒pBHGlox(delta) E1,3Cre共转染HEK 293细胞,获取重组腺病毒Ad-MCMV-PI16-GFP-3FLAG.转染HEK 293细胞大量扩增后,采用CsCl梯度离心法纯化病毒,半数组织培养感染剂量(TCID50)法测定病毒滴度.用Ad-MCMV-PI16-GFP-3FLAG感染hAVICs,Western blot检测PI16在hAVICs中的表达.结果 成功构建了表达PI16蛋白的重组腺病毒,滴度达到5.01×10TCID50/ml,转染hAVICs后能高效地表达PI16蛋白.结论 成功构建携带人PI16基因的重组腺病毒,为进一步研究PI16基因的作用提供了基础.
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