线粒体DNA缺失HepG2细胞系的建立、鉴定及放射生物学特性

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaojiagu
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目的为研究人肝癌细胞系Hep G2线粒体DNA(mt DNA)缺失后的放射生物学特性,建立并鉴定mt DNA缺失Hep G2(ρ0Hep G2)细胞系。测定辐射干预下mt DNA缺失(Rho0)肝癌细胞的凋亡情况、侵袭能力以及辐射敏感性的变化。方法在含有溴化乙锭(EB)、丙酮酸、尿嘧啶的特殊培养基中培养Hep G2细胞,经30次传代后,有限稀释法筛选完全去除mt DNA的克隆。去除丙酮酸及尿嘧啶后,观察细胞的存活情况。PCR法鉴定mt DNA的缺失。用6Mv X射线梯度剂量照射Hep G2细胞和ρ0Hep G2细胞,平板克隆法绘制生长曲线,线性二次方程拟合生存曲线,计算α/β。2Gy剂量辐射细胞,24 h后用Hochest33342细胞核染色,比较Hep G2细胞与ρ0Hep G2凋亡率的差异。用Transwell法测定两种不同细胞的侵袭能力。结果在含EB特殊培养环境下,Hep G2细胞可持续生长传代至30代,去除丙酮酸和尿嘧啶后,细胞短时间内大量死亡。经PCR法证实mt DNA完全缺失。ρ0Hep G2细胞α/β显著低于正常Hep G2细胞,辐射抵抗能力增强。辐射干预后ρ0Hep G2的凋亡比例显著减少。ρ0Hep G2穿膜细胞数显著增多。结论在EB长期诱导下,Hep G2肝癌细胞可被成功诱导为mt DNA缺失细胞。ρ0Hep G2细胞的辐射抵抗性显著增强,抗凋亡能力及侵袭能力均提高。
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