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摘 要： 目的 探讨使用HPLC法检测药品含量时，如何科学、合理的使用对照品。方法 使用《中国药典2015年版》高效液相色谱法分析药品含量的方法，采用2种对照品使用方法对6种药品进行检测。方法1使用3份对照品检测3份药品的含量；方法2使用1份对照品检测3份药品的含量，比较两种方法对药品检测结果的影响。结果 方法1和方法2检测药品含量的RSD%均小于5%，符合HPLC法检测的要求，但方法2可以节省2份对照品。结论 采用高效液相色谱法检测药品含量，采用方法2检测结果可靠，节省对照品，可在药品含量检测中推广使用。
关键词： 高效液相色谱法；含量测定；对照品
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）是使用高压输液泵将不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂或缓冲液作为流动相泵入装有固定相的色谱柱，经过进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，各成分被分离后，依此进入检测器进行检测，实现对样品的分析。在医学、化学、农业等多学科、多领域取得了广泛的应用[1]。HPLC由于检测快速、准确、灵敏度高，已被中国药典收录，成为药品含量检测的标准方法，但该方法检测需要国家标准品作为参比对照，故经济成本较高[2]。本着在不影响检测结果的同时能最大限度的节约对照品的原则，本研究拟采用一支对照品检测三份药品与三支对照品检测三份药品的方法进行比较，对两组检测结果进行比较，探讨本检测方法是否试用药品含量的检测。
1 材料与方法
1.1 材料
（1）枸橼酸西地那非片（批准文号：H20143255c，广州白云山医药集团有限公司白云山制药总厂），枸橼酸西地那非对照品（CAS编号：171599-83-0，规格100mg/支，国家标准品网）。
（2）注射用环磷腺苷（批准文号：H20063307，辽宁格林生物药业集团有限公司），环磷腺苷对照品（CAS编号：60-92-4，规格50mg/支，国家标准品网）。
（3）银杏内酯注射液（批准文号：Z20110035，成都百裕科技制药有限公司），银杏内酯C对照品（CAS编号：15291-76-6，规格20mg/支，国家标准品网）
（4）盐酸赖氨酸（批准文号：H22023689，吉林敖东洮南药业股份有限公司），盐酸赖氨酸对照品（CAS编号：10098-89-2，规格100mg/支，国家标准品网）
（5）阿昔洛韦片（批准文号：H53020156，云南昊邦制药有限公司），阿昔洛韦对照品（CAS编号：59277-89-3，规格100mg/支，国家标准品网）
（6）盐酸多巴酚丁胺（批准文号：H46020128，海南普利制药股份有限公司），盐酸多巴酚丁胺（CAS编号：49745-95-1，规格500mg/支）
1.2 方法
1.2.1 对照品使用规定
中国药典（2015版）关于在高效液相色谱法中，对含量测定的要求为，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高）按下式计算含量，CX=CRAX/AR。
1.2.2 含量的测定方法
采用高效液相色谱法测量供试品含量，测量6种药品。称量使用梅特勒电子天平AL204（梅特勒公司），高效液相色谱仪1260（美国安捷伦公司），试剂为分析纯和色谱纯。
方法1采用1支对照品测量一份供试品，共计测量三次，使用三支对照品。
方法2采用1支對照品测量三份供试品，共计测量三次，使用一支对照品。
2 结果
采用外标法，两种方法的检测结果见表1。两种方法检测的RSD%均小于5%，符合检测标准。
3 讨论
中国药典规定了在使用高效液相色谱法测定药品含量时的方法和计算公式以及基本操作要求，但是没有明确规定测量的次数是多少。国家权威机构和相关文献的操作规定也没有明确答案[3]。在方法1中是称取了三份对照品和三份样品进行检测，优点是对对照品进行了平行检测，但是分析的样品只有三份，就不能更多的反应被分析样品的状况。方法2虽然只取了一份对照品，但相当多的药检所和药厂使用的对照品都是中国食品药品鉴定研究院权威产品，对照品在生产时肯定是精心操作的，出品时肯定是有质量保证的，其中各种参数肯定是真实可信的，所以才称之为标准品（或对照品），供应全国有关部门对照使用。因此只要按照对照品使用说明书和相关仪器的操作规定认真操作，就可以防止系统误差。
在本研究中两种不同方法的检测数据基本一致，其数据真实可靠，也证明了本文的一支对照品检测三个样品的方法是可行的，也是可信的，实验结果支持本文结论。使用高效液相色谱法进行含量测定时，对照品的两种不同用法的实验数据基本一致，在同样科学合理的原则下，一支对照品检测三个样品的方法反应了更多的供试品数据，而且经济适用，在大多数情况下可以代替3支对照品检测3这样品的方法，本文最终目的是科学合理的特别是经济的使用对照品，提高食品药品的监管水平。
参考文献
[1] Chem A. Practical HPLC Method Development[J]. Carbohydrate Polymers， 2012， 16（3）：338-338.
[2] Xie J P， Wang H D， Sun W J. Preparation of epimedoside A and epimedin C reference substance from Epimedium wushanense by HPLC[J]. Chinese Traditional & Herbal Drugs， 2012， 43（1）：94-96.
[3] Sun L， Jin H Y， Tian R T， et al. A simple method for HPLC retention time prediction： linear calibration using two reference substances[J]. Chinese Medicine， 2017， 12（1）：16-17.
关键词： 高效液相色谱法；含量测定；对照品
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）是使用高压输液泵将不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂或缓冲液作为流动相泵入装有固定相的色谱柱，经过进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，各成分被分离后，依此进入检测器进行检测，实现对样品的分析。在医学、化学、农业等多学科、多领域取得了广泛的应用[1]。HPLC由于检测快速、准确、灵敏度高，已被中国药典收录，成为药品含量检测的标准方法，但该方法检测需要国家标准品作为参比对照，故经济成本较高[2]。本着在不影响检测结果的同时能最大限度的节约对照品的原则，本研究拟采用一支对照品检测三份药品与三支对照品检测三份药品的方法进行比较，对两组检测结果进行比较，探讨本检测方法是否试用药品含量的检测。
1 材料与方法
1.1 材料
（1）枸橼酸西地那非片（批准文号：H20143255c，广州白云山医药集团有限公司白云山制药总厂），枸橼酸西地那非对照品（CAS编号：171599-83-0，规格100mg/支，国家标准品网）。
（2）注射用环磷腺苷（批准文号：H20063307，辽宁格林生物药业集团有限公司），环磷腺苷对照品（CAS编号：60-92-4，规格50mg/支，国家标准品网）。
（3）银杏内酯注射液（批准文号：Z20110035，成都百裕科技制药有限公司），银杏内酯C对照品（CAS编号：15291-76-6，规格20mg/支，国家标准品网）
（4）盐酸赖氨酸（批准文号：H22023689，吉林敖东洮南药业股份有限公司），盐酸赖氨酸对照品（CAS编号：10098-89-2，规格100mg/支，国家标准品网）
（5）阿昔洛韦片（批准文号：H53020156，云南昊邦制药有限公司），阿昔洛韦对照品（CAS编号：59277-89-3，规格100mg/支，国家标准品网）
（6）盐酸多巴酚丁胺（批准文号：H46020128，海南普利制药股份有限公司），盐酸多巴酚丁胺（CAS编号：49745-95-1，规格500mg/支）
1.2 方法
1.2.1 对照品使用规定
中国药典（2015版）关于在高效液相色谱法中，对含量测定的要求为，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高）按下式计算含量，CX=CRAX/AR。
1.2.2 含量的测定方法
采用高效液相色谱法测量供试品含量，测量6种药品。称量使用梅特勒电子天平AL204（梅特勒公司），高效液相色谱仪1260（美国安捷伦公司），试剂为分析纯和色谱纯。
方法1采用1支对照品测量一份供试品，共计测量三次，使用三支对照品。
方法2采用1支對照品测量三份供试品，共计测量三次，使用一支对照品。
2 结果
采用外标法，两种方法的检测结果见表1。两种方法检测的RSD%均小于5%，符合检测标准。
3 讨论
中国药典规定了在使用高效液相色谱法测定药品含量时的方法和计算公式以及基本操作要求，但是没有明确规定测量的次数是多少。国家权威机构和相关文献的操作规定也没有明确答案[3]。在方法1中是称取了三份对照品和三份样品进行检测，优点是对对照品进行了平行检测，但是分析的样品只有三份，就不能更多的反应被分析样品的状况。方法2虽然只取了一份对照品，但相当多的药检所和药厂使用的对照品都是中国食品药品鉴定研究院权威产品，对照品在生产时肯定是精心操作的，出品时肯定是有质量保证的，其中各种参数肯定是真实可信的，所以才称之为标准品（或对照品），供应全国有关部门对照使用。因此只要按照对照品使用说明书和相关仪器的操作规定认真操作，就可以防止系统误差。
在本研究中两种不同方法的检测数据基本一致，其数据真实可靠，也证明了本文的一支对照品检测三个样品的方法是可行的，也是可信的，实验结果支持本文结论。使用高效液相色谱法进行含量测定时，对照品的两种不同用法的实验数据基本一致，在同样科学合理的原则下，一支对照品检测三个样品的方法反应了更多的供试品数据，而且经济适用，在大多数情况下可以代替3支对照品检测3这样品的方法，本文最终目的是科学合理的特别是经济的使用对照品，提高食品药品的监管水平。
参考文献
[1] Chem A. Practical HPLC Method Development[J]. Carbohydrate Polymers， 2012， 16（3）：338-338.
[2] Xie J P， Wang H D， Sun W J. Preparation of epimedoside A and epimedin C reference substance from Epimedium wushanense by HPLC[J]. Chinese Traditional & Herbal Drugs， 2012， 43（1）：94-96.
[3] Sun L， Jin H Y， Tian R T， et al. A simple method for HPLC retention time prediction： linear calibration using two reference substances[J]. Chinese Medicine， 2017， 12（1）：16-17.