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【摘 要】目的：探讨强冷凝集对血常规检测结果的影响及处理方法。方法：对强冷凝集的血常规检测标本分别采用未处理的直接检测法、37℃水浴法、血浆置换法、标本3倍稀释37℃水浴法，利用sysmexXT-4000血细胞分析仪进行检测，并与传统的显微镜手工计数法计数WBC、RBC、PLT 、微量法测定HCT等项目结果进行分析比较。结果：强冷凝集的标本检测时，仪器出现红细胞凝集相关报警。与传统方法比较，PLT、WBC测定受强冷凝集素影响较小；而强冷凝集素对RBC、HCT、MCV、MCH和MCHC的测定造成严重干扰，其中RBC、HCT显著减低，MCV、MCH和MCHC异常增高，Hb与RBC比例明显异常。PLT用直接检测法、37水浴法、3倍稀释37℃水浴法所测结果，RBC、HCT 用血浆置换法、稀释3倍法所测结果以及WBC用上述4种方法所测结果与传统方法比较差异均不大，符合CLIA，88能力验证计划的分析质量要求。但血浆置换法对PLT影响明显；而直接检测法、37℃水浴法对RBC、HCT影响明显。结论：对强冷凝集标本推荐采用3倍稀释37℃水浴法检测，可以有效地消除强冷凝集对血常规检测结果的干扰。
【关键词】冷凝集；血常规；水浴；3倍稀释；微量法
【中图分类号】R 446.11 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）09—0003—02
血常规是临床应用最广泛的检验项目之一，也是临床医生最先获得患者资料的检验项目，先进的全自动血液分析仪可提供许多有价值的检测结果，其准确性直接影响临床对疾病的诊断和治疗。在日常检验工作中，某些因素可干扰血液分析仪计数而出现异常检测结果，冷凝集是常见的干扰因素之一。现将我科遇到的1例强冷凝集对血常规检测结果的影响进行分析，并对处理方法进行探讨。
1 资料与方法
1.1病例资料 某男，58岁。2013年4月23日因骨折前来我院就诊（经询问其是位免疫性溶血性贫血患者）。其血常规检测结果见表1。
1.2 仪器与试剂 日本Sysmex公司的XT-4000的血液分析仪与配套原装试剂，四川迈克生物科技股份有限公司的质控物，OlympusCX21双目显微镜，移液器（20-200μl），微量吸管，毛细管，EDTA—K2末梢血抗凝管，高速离心机。仪器使用前均已校准，每日测定质控物，结果均在允许范围内。
1.3 分析方法
1.3.1血常规分析方法
将冷凝集标本，采用下述不同方法处理后在SysmexXT-4000上检测。①直接检测；②37℃水浴30min后检测；③160g离心6min，弃上清后加入等量的稀释液充分混匀，反复洗涤3次后上机检测；④采用EDTA—K2末梢血抗凝管，取40μl末梢血加入80μl稀释液中，37℃水浴30min后检测。同时采用手工显微镜方法计数白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）；以及微量法测定红细胞比容（HCT）：取末梢血，充入含有肝素抗凝剂的一次性专用毛细管内，封口后，用水平式毛细管离心机125000g离心5min，用专用刻度尺，读取红细胞柱和全柱长度，计算HCT值【1】。
1.3.2 冷凝集素效价测定
抽取患者不抗凝静脉血2ml，37℃水浴凝固后，迅速分离血清。取血清0.5ml用生理盐水倍比稀释后，加等量用生理盐水洗涤后的3人份混合的2%“O”型红细胞悬液混匀，4℃冰箱中静置2-4h后观察结果【1】。
2 结果
2.1 数据结果
强冷凝集的标本检测时，仪器出现红细胞凝集相关报警。由表1检测结果可知，与传统方法比较，PLT、WBC测定受强冷凝集素影响较小；而强冷凝集素对RBC、HCT、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）的测定造成严重干扰，其中RBC、HCT顯著减低，MCV、MCH和MCHC异常增高，Hb与RBC比例明显异常。 PLT用直接检测法、37水浴法、3倍稀释37℃水浴法所测结果，RBC、HCT 用血浆置换法、稀释3倍法所测结果以及WBC用上述4种方法所测结果与传统方法比较差异均不大，符合CLIA，88能力验证计划的分析质量要求【1】。但血浆置换法对PLT影响明显 ；而直接检测法、37℃水浴法对RBC 、HCT影响明显。
2.2 冷凝集效价检测结果
冷凝集效价检测结果为1：2048。
3讨论
冷凝集素是红细胞自身免疫抗体，多数以IgM型，少数为IgG、IgA型或它们的混合型[2]。大多数人血清中都存在冷凝集素，其效价在4℃ 时一般小于1：16，不会导致自身红细胞的凝集。但在某些病理（如自身免疫性溶血性贫血、支原体肺炎等）情况下，冷凝集素效价可异常增高。含有较高效价冷凝集素的血液离体后温度降低，较高效价冷凝集素与红细胞抗原相结合，使红细胞自身发生凝集，有时可见白细胞和血小板凝集，但这种凝集是可逆的，当温度升高后（如37℃水浴），凝集的红细胞可自动解聚[3]。但当冷凝集素的效价高达1：10000以上时，标本即使经过37℃水浴30min后仍可导致RBC、HCT结果出现很大偏差，且MCH、MCHC的值与正常参考值极度偏离[4]，本文主要探讨强冷凝集对血常规检测结果的影响。
对于强冷凝集的标本经37℃水浴30min后无法有效消除冷凝集素对RBC、HCT检测的干扰。直接检测法和37℃水浴法RBC和HCT结果均显著下降，MCH和MCHC结果均显著增高，MCV轻度增高。这种现象是由于冷凝集素使红细胞聚集，导致RBC计数减少，从而导致HCT结果降低，MCH、MCHC的计算值显著增高。冷凝集对PLT的干扰文献报道不一致，本例结果显示PLT基本未受影响。
血浆置换法与手工计数法所测WBC、RBC及HCT的结果基本一致，而PLT的检测结果明显偏低，这可能是由于在血浆置换过程中吸弃血浆时，PLT易被一起吸掉有关，因为血液离心后自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层、红细胞层，且离心力较低时，上层血浆富含血小板。结果提示，如用血浆置换法消除强冷凝集对血常规检测结果的影响，PLT计数需采用直接检测或37℃水浴后的结果。
经过3倍稀释37℃水浴后检测得到的各项结果与手工法检测的结果基本一致。这可能是由于稀释的作用导致标本的冷凝集素效价降低，成为相对较弱的冷凝集，此时将稀释后的标本37℃水浴30min即可消除冷凝集素对RBC、HCT的影响。由此可见3倍稀释37℃水浴法能够有效消除强冷凝集标本对血常规检测干扰，此时检验结果准确可靠。但是需要注意，稀释的倍数必须准确，并且也要明确结果对应的稀释倍数，以确保报告的准确。
综上所述，为避免强冷凝集现象对血常规检测结果的干扰，建议在日常工作中遇到强冷凝集标本时，果断采取样本3倍稀释37℃水浴的方法，这样既能够有效的消除强冷凝集现象，同时能够节约时间，保证检验报告及时准确的发出。
参考文献：
[1]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程，第3版（M）.南京：东南大学出版社，2006.193、80、129
[2]徐健，周道银，俞靖龙等.冷凝集素对血常规检测结果的影响及处理方案探讨[J].现代检验医学杂志 2011，26（6）：105-108
[3]盛磊，梁炜炜. 冷凝集素对血液分析仪检测结果的影响及消除[J].农垦医学，2007，29（3），210-211
[4]曾令军，李莉，吴庆等.高效价冷凝集素对血常规检测结果的影响及消除方法探讨[J].罕少疾病杂志，2011，18（5） 2-6
【关键词】冷凝集；血常规；水浴；3倍稀释；微量法
【中图分类号】R 446.11 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）09—0003—02
血常规是临床应用最广泛的检验项目之一，也是临床医生最先获得患者资料的检验项目，先进的全自动血液分析仪可提供许多有价值的检测结果，其准确性直接影响临床对疾病的诊断和治疗。在日常检验工作中，某些因素可干扰血液分析仪计数而出现异常检测结果，冷凝集是常见的干扰因素之一。现将我科遇到的1例强冷凝集对血常规检测结果的影响进行分析，并对处理方法进行探讨。
1 资料与方法
1.1病例资料 某男，58岁。2013年4月23日因骨折前来我院就诊（经询问其是位免疫性溶血性贫血患者）。其血常规检测结果见表1。
1.2 仪器与试剂 日本Sysmex公司的XT-4000的血液分析仪与配套原装试剂，四川迈克生物科技股份有限公司的质控物，OlympusCX21双目显微镜，移液器（20-200μl），微量吸管，毛细管，EDTA—K2末梢血抗凝管，高速离心机。仪器使用前均已校准，每日测定质控物，结果均在允许范围内。
1.3 分析方法
1.3.1血常规分析方法
将冷凝集标本，采用下述不同方法处理后在SysmexXT-4000上检测。①直接检测；②37℃水浴30min后检测；③160g离心6min，弃上清后加入等量的稀释液充分混匀，反复洗涤3次后上机检测；④采用EDTA—K2末梢血抗凝管，取40μl末梢血加入80μl稀释液中，37℃水浴30min后检测。同时采用手工显微镜方法计数白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）；以及微量法测定红细胞比容（HCT）：取末梢血，充入含有肝素抗凝剂的一次性专用毛细管内，封口后，用水平式毛细管离心机125000g离心5min，用专用刻度尺，读取红细胞柱和全柱长度，计算HCT值【1】。
1.3.2 冷凝集素效价测定
抽取患者不抗凝静脉血2ml，37℃水浴凝固后，迅速分离血清。取血清0.5ml用生理盐水倍比稀释后，加等量用生理盐水洗涤后的3人份混合的2%“O”型红细胞悬液混匀，4℃冰箱中静置2-4h后观察结果【1】。
2 结果
2.1 数据结果
强冷凝集的标本检测时，仪器出现红细胞凝集相关报警。由表1检测结果可知，与传统方法比较，PLT、WBC测定受强冷凝集素影响较小；而强冷凝集素对RBC、HCT、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）的测定造成严重干扰，其中RBC、HCT顯著减低，MCV、MCH和MCHC异常增高，Hb与RBC比例明显异常。 PLT用直接检测法、37水浴法、3倍稀释37℃水浴法所测结果，RBC、HCT 用血浆置换法、稀释3倍法所测结果以及WBC用上述4种方法所测结果与传统方法比较差异均不大，符合CLIA，88能力验证计划的分析质量要求【1】。但血浆置换法对PLT影响明显 ；而直接检测法、37℃水浴法对RBC 、HCT影响明显。
2.2 冷凝集效价检测结果
冷凝集效价检测结果为1：2048。
3讨论
冷凝集素是红细胞自身免疫抗体，多数以IgM型，少数为IgG、IgA型或它们的混合型[2]。大多数人血清中都存在冷凝集素，其效价在4℃ 时一般小于1：16，不会导致自身红细胞的凝集。但在某些病理（如自身免疫性溶血性贫血、支原体肺炎等）情况下，冷凝集素效价可异常增高。含有较高效价冷凝集素的血液离体后温度降低，较高效价冷凝集素与红细胞抗原相结合，使红细胞自身发生凝集，有时可见白细胞和血小板凝集，但这种凝集是可逆的，当温度升高后（如37℃水浴），凝集的红细胞可自动解聚[3]。但当冷凝集素的效价高达1：10000以上时，标本即使经过37℃水浴30min后仍可导致RBC、HCT结果出现很大偏差，且MCH、MCHC的值与正常参考值极度偏离[4]，本文主要探讨强冷凝集对血常规检测结果的影响。
对于强冷凝集的标本经37℃水浴30min后无法有效消除冷凝集素对RBC、HCT检测的干扰。直接检测法和37℃水浴法RBC和HCT结果均显著下降，MCH和MCHC结果均显著增高，MCV轻度增高。这种现象是由于冷凝集素使红细胞聚集，导致RBC计数减少，从而导致HCT结果降低，MCH、MCHC的计算值显著增高。冷凝集对PLT的干扰文献报道不一致，本例结果显示PLT基本未受影响。
血浆置换法与手工计数法所测WBC、RBC及HCT的结果基本一致，而PLT的检测结果明显偏低，这可能是由于在血浆置换过程中吸弃血浆时，PLT易被一起吸掉有关，因为血液离心后自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层、红细胞层，且离心力较低时，上层血浆富含血小板。结果提示，如用血浆置换法消除强冷凝集对血常规检测结果的影响，PLT计数需采用直接检测或37℃水浴后的结果。
经过3倍稀释37℃水浴后检测得到的各项结果与手工法检测的结果基本一致。这可能是由于稀释的作用导致标本的冷凝集素效价降低，成为相对较弱的冷凝集，此时将稀释后的标本37℃水浴30min即可消除冷凝集素对RBC、HCT的影响。由此可见3倍稀释37℃水浴法能够有效消除强冷凝集标本对血常规检测干扰，此时检验结果准确可靠。但是需要注意，稀释的倍数必须准确，并且也要明确结果对应的稀释倍数，以确保报告的准确。
综上所述，为避免强冷凝集现象对血常规检测结果的干扰，建议在日常工作中遇到强冷凝集标本时，果断采取样本3倍稀释37℃水浴的方法，这样既能够有效的消除强冷凝集现象，同时能够节约时间，保证检验报告及时准确的发出。
参考文献：
[1]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程，第3版（M）.南京：东南大学出版社，2006.193、80、129
[2]徐健，周道银，俞靖龙等.冷凝集素对血常规检测结果的影响及处理方案探讨[J].现代检验医学杂志 2011，26（6）：105-108
[3]盛磊，梁炜炜. 冷凝集素对血液分析仪检测结果的影响及消除[J].农垦医学，2007，29（3），210-211
[4]曾令军，李莉，吴庆等.高效价冷凝集素对血常规检测结果的影响及消除方法探讨[J].罕少疾病杂志，2011，18（5） 2-6