特异核酸捕获-PCR技术在从高背景标本中检测TT病毒DNA的应用

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lanaya0903
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目的解决因TTV在样本中的水平极低而导致从高背景核酸样本中检测TTV DNA存在非特异性扩增的问题。方法采用亲和素生物素系统将TTV特异的核酸片段包被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的TTV DNA,从而建立特异核酸捕获-PCR检测TTV DNA方法,并以10份血清(4份TTV DNA阳性)和肝组织配对标本为对象与抽提法进行比较,阳性产物进行DNA序列分析,最后评价特异核酸捕获-PCR的特异性。结果抽提法在血清和肝组织中的检出率分别为4/10和9/10。RFLP初步分析产物具有特异性,但经DNA序列分析证实的检出率仅分别为2/10和3/10。采用特异核酸捕获-PCR检测的结果与抽提法经DNA序列分析后的结果一致,获得的电泳条带也更为清晰。结论特异核酸捕获-PCR方法能显著提高TTV DNA检测的特异性,特别是针对高背景核酸标本,表明该方法在其他低水平病原体检测及高背景核酸样本检测中也有广泛的应用前景。目前广泛采用的TTV DNA检测方法如不进行DNA序列分析则可导致过高地估计了TTV的感染率。
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