【摘 要】
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目的:以CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建Smad3基因敲除的人腹膜间皮细胞(HPMC),研究Smad3在HPMC增殖和凋亡中的调控机制。方法:利用CRISPR Design软件设计gRNA,比对后合成,构建
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.81660133),广西自然科学基金资助项目(No.2018GXNSFAA050047)
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目的:以CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建Smad3基因敲除的人腹膜间皮细胞(HPMC),研究Smad3在HPMC增殖和凋亡中的调控机制。方法:利用CRISPR Design软件设计gRNA,比对后合成,构建Smad3 gRNA-PX459质粒,用Lipofectamine 3000转染细胞,嘌呤霉素筛选后用有限稀释法获得单克隆细胞株,提取DNA进行PCR扩增后测序,同时提取总蛋白,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测蛋白表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋
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