【摘 要】
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目的:制备小鼠双尾C蛋白Bicc1的多克隆抗体并确定其在细胞内定位。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增小鼠Bicc1编码61E-199A的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载
【机 构】
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内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室; 中国医学科学院肿瘤医院(肿瘤研究所); 中国科学院昆明动物研究所;
【基金项目】
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长江学者计划支持项目(2005~2008年度);国家自然科学基金资助项目(30572205;30672483)
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目的:制备小鼠双尾C蛋白Bicc1的多克隆抗体并确定其在细胞内定位。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增小鼠Bicc1编码61E-199A的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生Bicc1-N抗原。纯化目的蛋白并制备兔抗Bicc1蛋白多克隆抗体。Western blot鉴定抗体特异性,并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位。结果:成功构建Bicc1-N片段原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,制备小鼠Bicc1蛋白的多克隆抗体,并证实该蛋白主要表达于细胞质内。结论:成功制备了高效价并特异的兔抗Bicc1多克隆抗体,为进一步研究Bicc1基因产物的生物功能奠定了基础。
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