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摘 要：采用分光光度法测定乳粉中左旋肉碱的含量，从温度和时间对反应的影响进行分析研究，
关键词：分光光度法；左旋肉碱；反应温度；反应时间
中图分类号：TS252.51 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）11-0120-03
1 材料与方法
1.1 试验材料、仪器与试剂
1.1.1 试验材料 两种乳粉，标记为样品1和样品2。
1.1.2 仪器
1.2 试验原理
试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤，滤液经碱皂化后使其中结合态的左旋肉碱游离出来；左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A；
1.3 试验方法
1.3.1 样品处理
1.3.2 标准溶液配置 2 结果与分析
2.1 加入显色剂和乙酰辅酶A后反应温度和时间的确定
吸光度随时间的变化
2.2 加入乙酰肉碱转移酶后反应温度和时间的确定
2.3 标准曲线制作及样品测定将分光光度计的波长调为412 nm。准确吸取2 ml不同浓度左旋肉碱标准溶液或样品处理液至具塞比色皿中，加入0.8 ml显色剂和100 μl乙酰辅酶A溶液，混合均匀后放入分光光度计中并计时， 6 min后归零；迅速加入100 μl乙酰肉碱转移酶溶液，混合均匀后放入分光光度计中，反应6 min后记录吸光度（表1）。以左旋肉碱标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。得到标准曲线回归方程相关系数R=1，由此计算出样品1乳粉中左旋肉碱的含量为25.8 mg/100g，样品2为24.2 mg/100g。
表1 左旋肉碱标准溶液及样液的吸光度
3 小结
在加入显色剂和乙酰辅酶A后，试剂会产生一个本底值吸光度，所以在测量中要扣除该吸光度。温度对反应的影响比较显著，在比较高的温度（29℃）下反应时间缩短，但不宜控制，故选用室温24℃并保持实验过程中温度恒定，在此条件下，加入显色剂和乙酰辅酶A 6 min后归零，再加入乙酰肉碱转移酶反应6 min。如果环境温度较低，可以适当延长归零时间和反应时间至10 min。
参 考 文 献：
[1] 杨 能，张惟杰.L-肉碱的生理功能与生物学方法生产[J].生物化学与生物物理学进展，1992，19（2）：81-85.
[2] 向智男.左旋肉碱的制备、功能及其应用[J]. 中国食品添加剂，2007，s1：386-390.
[3] 毕伟建，黄金发.左旋肉碱在食品中的应用 [J]. 广西工业，2010，8：16-17.
[4] Li K， Li W， Huang Y F.Determination of free L-carnitine in human seminal plasma by high performance liquid chromatography with pre-column ultraciolet derivatization and its clinical application in male infertility[J].Clinica Chimica Acta， 2007，378（1-2）：159-163.
[5] Vernez L， Hopfgartner G， Wenk M， et al. Determination of carnitine and acylcarnitines in urine by high-performance liquid chromatography-electrospray ionization ion trap tandem mass spectrometry [J]. Journal of Chromatography A，2003，984（2）：203-213.
[6] 王天西，熊文明，林梦勇.分光光度法测定乳粉中左旋肉碱含量[J].福建分析测试，2012，21（1）：52-56.
关键词：分光光度法；左旋肉碱；反应温度；反应时间
中图分类号：TS252.51 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）11-0120-03
1 材料与方法
1.1 试验材料、仪器与试剂
1.1.1 试验材料 两种乳粉，标记为样品1和样品2。
1.1.2 仪器
1.2 试验原理
试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤，滤液经碱皂化后使其中结合态的左旋肉碱游离出来；左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A；
1.3 试验方法
1.3.1 样品处理
1.3.2 标准溶液配置 2 结果与分析
2.1 加入显色剂和乙酰辅酶A后反应温度和时间的确定
吸光度随时间的变化
2.2 加入乙酰肉碱转移酶后反应温度和时间的确定
2.3 标准曲线制作及样品测定将分光光度计的波长调为412 nm。准确吸取2 ml不同浓度左旋肉碱标准溶液或样品处理液至具塞比色皿中，加入0.8 ml显色剂和100 μl乙酰辅酶A溶液，混合均匀后放入分光光度计中并计时， 6 min后归零；迅速加入100 μl乙酰肉碱转移酶溶液，混合均匀后放入分光光度计中，反应6 min后记录吸光度（表1）。以左旋肉碱标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。得到标准曲线回归方程相关系数R=1，由此计算出样品1乳粉中左旋肉碱的含量为25.8 mg/100g，样品2为24.2 mg/100g。
表1 左旋肉碱标准溶液及样液的吸光度
3 小结
在加入显色剂和乙酰辅酶A后，试剂会产生一个本底值吸光度，所以在测量中要扣除该吸光度。温度对反应的影响比较显著，在比较高的温度（29℃）下反应时间缩短，但不宜控制，故选用室温24℃并保持实验过程中温度恒定，在此条件下，加入显色剂和乙酰辅酶A 6 min后归零，再加入乙酰肉碱转移酶反应6 min。如果环境温度较低，可以适当延长归零时间和反应时间至10 min。
参 考 文 献：
[1] 杨 能，张惟杰.L-肉碱的生理功能与生物学方法生产[J].生物化学与生物物理学进展，1992，19（2）：81-85.
[2] 向智男.左旋肉碱的制备、功能及其应用[J]. 中国食品添加剂，2007，s1：386-390.
[3] 毕伟建，黄金发.左旋肉碱在食品中的应用 [J]. 广西工业，2010，8：16-17.
[4] Li K， Li W， Huang Y F.Determination of free L-carnitine in human seminal plasma by high performance liquid chromatography with pre-column ultraciolet derivatization and its clinical application in male infertility[J].Clinica Chimica Acta， 2007，378（1-2）：159-163.
[5] Vernez L， Hopfgartner G， Wenk M， et al. Determination of carnitine and acylcarnitines in urine by high-performance liquid chromatography-electrospray ionization ion trap tandem mass spectrometry [J]. Journal of Chromatography A，2003，984（2）：203-213.
[6] 王天西，熊文明，林梦勇.分光光度法测定乳粉中左旋肉碱含量[J].福建分析测试，2012，21（1）：52-56.