【摘 要】
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以烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）基因组DNA为模板,采用单因素和正交设计L16（45）相结合的方法对影响ISSR-PCR反应的主要因子进行优化,并对采自东北三省烟区的20个烟草靶斑病菌
【机 构】
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沈阳农业大学植物保护学院,沈阳市疾病预防控制中心,内蒙古民族大学农学院,黑龙江省烟草公司牡丹江烟草科学研究所
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以烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）基因组DNA为模板,采用单因素和正交设计L16（45）相结合的方法对影响ISSR-PCR反应的主要因子进行优化,并对采自东北三省烟区的20个烟草靶斑病菌菌株进行ISSR分析,建立了适宜于病菌的ISSR分子标记的最佳反应体系,即20μL的反应体系中含有模板DNA 30ng,Mg2+浓度2.0mmol·L-1,d NTP浓度0.20 mmol·L-1,Taq酶1.0U,引物浓度0.4μmol·L-1。利用优化的反应体系从20个ISSR引物中筛选出13个多态性和重复性好的引物,对20个烟草靶斑病菌菌株进行ISSR分析,共扩增出132条带,多态条带比率为73.48%,在相似系数0.74处将其划分为3个类群,其中LTL-7、HLK-1、HBX-2、HBX-4、LFC-9、LTL-5、LTL-9和JLH-1共8个菌株被划分在IGⅠ中;IGⅡ中包括LTL-6、LKD-8、HLK-3、LTL-115、LTL-2、LFC-4和LTL-8共7个菌株;其余5个菌株分别为LTL-66、LTL-111、HLK-4、JLH-3和LTL-22被划分到IGⅢ中。分析结果表明ISSR遗传聚类组群与菌株的地理来源具有一定的相关性,而与菌株的致病性无明显的相关性。
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