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目的：建立一步法荧光定量RT—PCR方法快速检测肠道病毒EV71。方法：从Genebank中找出最近2—3年中国大陆区域流行的EV71病毒VP1基因的序列进行比对，找出2—3个相对保守区域设计引物及taqman探针。筛选出一套表现良好的引物并进行反应条件的优化。结果：筛选出一套对EV71病毒具有高度灵敏度和特异性的引物及taqman探针，检测灵敏度达10copies VP1／μL，整个操作过程仅需2—3h。结论：该套引物及探针针对EV71具有良好特性，是用于EV71的日常监测和暴发时的应急诊断。