【摘 要】
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目的探讨间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇(Doc)诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型的影响。方法人非小细胞肺癌1299细胞株细胞分为3组，常规组、Doc(24h)组和Doc(24h) 3d组。常规组为二甲基亚砜处理细胞24h；Doc(24h)组为100nmol/L的Doc处理细胞24h；Doc(24h) 3d组为100nmol/L的Doc处理细胞24h，更换新鲜的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，继续培养3d。Doc(24h) 3d组细胞分为2组，Doc组和Doc CM组。Doc组为含10%胎牛血清的
【机 构】
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北部战区总医院基础医学实验室，沈阳 110016北部战区总医院基础医学实验室，沈阳 110016北部战区总医院基础医学实验室，沈阳 110016北部战区总医院基础医学实验室，沈阳 110016北部战区
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目的探讨间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇(Doc)诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型的影响。
方法人非小细胞肺癌1 299细胞株细胞分为3组，常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h) 3 d组。常规组为二甲基亚砜处理细胞24 h；Doc(24 h)组为100 nmol/L的Doc处理细胞24 h；Doc(24 h) 3 d组为100 nmol/L的Doc处理细胞24 h，更换新鲜的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，继续培养3 d。Doc(24 h) 3 d组细胞分为2组，Doc组和Doc CM组。Doc组为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养4 d；Doc CM组为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和hUC-MSC-CM(1∶1)的混合培养基中培养4 d。Hoechst 33342染色观察细胞核形态，流式细胞术分析细胞DNA含量、线粒体膜电位及DNA损伤应答信号分子磷酸化组蛋白H2A.X(γ-H2A.X)的表达，衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性，实时定量聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测衰老相关的炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)与白细胞介素8(IL-8)的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。
结果Doc(24 h)组和Doc(24 h) 3 d组细胞核体积增大、DNA含量增加，常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h) 3 d组多倍体细胞百分比分别为(12.27±3.29)%、(27.13±6.02)%和(43.60±4.26)%，Doc(24 h)组和Doc(24 h) 3 d组细胞百分比明显高于常规组，差异有统计学意义(F＝33.91，P＝0.001)。常规组、Doc(24 h)组与Doc(24 h) 3 d组细胞密度分别为(8.18±0.54)×104/cm2、(3.78±0.54)×104/cm2及(0.75±0.08)×104/cm2，Doc(24 h)组与Doc(24 h) 3 d组细胞密度显著低于常规组，差异有统计学意义(F＝212.55，P＝0.001)。常规组细胞β-半乳糖苷酶无活性，细胞染色阴性，Doc(24 h)组与Doc(24 h) 3 d组中观察到有呈蓝色的阳性染色细胞，β-半乳糖苷酶活性增强。流式细胞术分析线粒体膜电位，常规组、Doc组与Doc CM组的JC-1单体百分比分别为(1.7±1.2)%、(48.2±12.9)%及(46.6±12.0)%，Doc组与Doc CM组低电势细胞百分比明显高于常规组，差异有统计学意义(F＝20.15，P＝0.002)，Doc组细胞与Doc CM组细胞线粒体膜电位比较，差异无统计学意义(F＝20.15，P＝0.854)。常规组、Doc组与Doc CM组中γ-H2A.X表达阳性的细胞百分比分别为(54.9±3.2)%、(58.9±4.0)%及(60.6±5.4)%，差异无统计学意义(F＝1.40，P＝0.317)。Doc组与Doc CM组γ-H2A.X荧光信号强度明显高于常规组，荧光信号右移，Doc组与Doc CM组γ-H2A.X荧光信号强度没有差异，荧光信号没有偏移。Doc组IL-6与IL-8的mRNA表达水平是常规组的(7.22±0.34)倍及(157.64±7.49)倍，差异有统计学意义(t＝1.00，P＝0.001)。Doc CM组IL-6与IL-8的mRNA表达水平是Doc组的(48±6)%及(43±3)%，差异有统计学意义( t＝1.00，P＝0.001)。
结论Doc诱导人非小细胞肺癌1 299细胞株细胞产生多倍体肿瘤细胞，即多倍体肺癌细胞，多倍体肺癌细胞表现多种衰老表型特征，hUC-MSC-CM不改变Doc诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型，但显著降低了炎性因子IL-6和IL-8的mRNA表达水平。
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