非结构蛋白NS1-ELISA检测禽流感野毒感染抗体

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利用RT-PCR技术扩增获得了H5N2亚型禽流感病毒的NSl基因,ORF长度为678bp。成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),用终浓度1mmol/l的IPTG诱导表达5h,经15%的SDS-PAGE分析表明,诱导表达出了分子量大约为28KD的NS1融合蛋白,且以包涵体的形式存在。NSl融合蛋白经HistrapHpKit柱子纯化或用尿素变性复性,获得纯度较高的NS1蛋白,并以此为抗原,建立了检测抗NS1蛋白抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法。最佳包被浓度为2.5μg/m
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