一种高效稳定的磷酸钙转染HEK293T细胞的方法

来源 :浙江大学学报：农业与生命科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：huihuiwang

【摘要】

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为了克服磷酸钙转染法在真核细胞中转染效率低和不稳定性等缺点，适用于体外在哺乳细胞中高效表达外源蛋白，将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）表达质粒通过常规的磷酸

【作者】

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况野房有荣刘丽王蓉严子琴李海龙孟凡国盛清欧文

【机构】

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浙江理工大学生命科学学院,浙江清华长三角研究院

【出处】

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浙江大学学报：农业与生命科学版

【发表日期】

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2015年4期

【关键词】

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磷酸钙转染 HEK293T细胞转染促进剂甘油丁酸钠氯喹 calcium phosphate-transfection HEK293T cell tr

【基金项目】

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浙江省重大科技专项（2012C03007-4）,浙江省公益技术应用研究计划项目（2014C33234）,浙江省嘉兴市科技计划项目（2014AY21021）,浙江省高校生物学重中之重一级学科：浙江理工大学科研启动基金（14042107-Y）.

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为了克服磷酸钙转染法在真核细胞中转染效率低和不稳定性等缺点，适用于体外在哺乳细胞中高效表达外源蛋白，将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）表达质粒通过常规的磷酸钙转染法导入到HEK293T细胞中，对影响质粒转染效率的条件逐步予以优化，具体包括：在制备磷酸钙-DNA沉淀复合物时，对DNA质粒的用量和涡旋混匀时间的优化；磷酸钙-DNA沉淀形成后对转染促进剂（甘油、丁酸钠和氯喹）的浓度、作用时间及其组合进行优化和筛选．结果表明：GFP转染6孔板培养的HEK293T细胞的DN

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