miR-16逆转录病毒载体的构建与表达检测

来源 :黑龙江动物繁殖 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lxxfeng

【摘要】

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为了探明miR16在体细胞重编程过程中的作用机制，构建小鼠miR-16逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR16的相关序列，从小鼠基因组中扩增miR-16核心序列并将其连接到pMD18-simple载

【作者】

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王皓孙宏瑶侯坤朴善花安铁洙王春生

【机构】

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东北林业大学生命科学学院

【出处】

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黑龙江动物繁殖

【发表日期】

：

2015年3期

【关键词】

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MICRORNA miR-16 载体构建表达检测 microRNA miR-16 vector construction expression exam

【基金项目】

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国家自然科学基金资助项目（31271441）

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为了探明miR16在体细胞重编程过程中的作用机制，构建小鼠miR-16逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR16的相关序列，从小鼠基因组中扩增miR-16核心序列并将其连接到pMD18-simple载体，对重组质粒进行双酶切回收目的片段。将目的片段与pMXs逆转录病毒载体连接，经过酶切、PCR和测序鉴定，最终构建逆转录病毒载体miR16-pMXs；采用脂质体法将miR16-pMXs转染plat-E细胞，以包装逆转录病毒颗粒；用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞，在侵染后的第5天，提取被侵染细胞的总RN

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