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【摘 要】目的：检测雌激素受体亚型ERα在子宫肌瘤中的表达，探讨 ERα与子宫肌瘤的发生、发展之间的关系。 方法：收集子宫肌瘤组织标本30例，相应肌瘤包膜外正常子宫肌层组织30例 ，选取正常子宫肌层组织10例。应用免疫组化 S-P法 ，检测ERα在子宫肌瘤组织、肌瘤包膜外正常子宫肌层组织及正常子宫肌层组织中的表达。结果：30例子宫肌瘤组织中，29例ERα蛋白阳性表达（ 29/30），30例肌瘤包膜外正常子宫肌层组织中21例阳性表达（21/30）， 10例正常子宫肌层组织中7例阳性表达（ 7/10）， 三组不同组织ERα蛋白阳性率比较有非常显著性差异（x 2=8.06， P =0.004）。 结论：雌激素受体亚型ERα与子宫肌瘤的发生、发展有关。
【关键词】ERα；免疫组化；肌瘤组织；肌层组织
【中图分类号】R737.33 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0034—01
子宫肌瘤是妇科最常见的良性肿瘤，生育期妇女其发病率约为20%～25%，占女性生殖器良性肿瘤的52%。长期以来关于子宫肌瘤病因的研究颇多，确切发病机制不清。目前为止， 一般认为雌激素有诱发并促进子宫肌瘤生长的作用，近来研究表明孕激素对子宫肌瘤更有促生长作用[1， 2]。雌、孕激素的生理作用分别由雌、孕激素受体介导。 雌激素受体分为α和β两种亚型[3] ，由两个独立的基因编码。 ERα和ERβ具有不同的调节基因转录的活性，最终发挥不同的临床作用。
1 实验材料与方法
1.1 材料
1.1.1實验对象 为2012年5月-2012年12月在沈阳市红十字会医院因子宫肌瘤行子宫切除术的30例患者和因宫颈CINⅢ级或子宫脱垂行子宫切除术的10例患者的石蜡组织标本。肌瘤组：取子宫肌瘤结节中心部位组织30例，患者年龄35 ～ 40岁，平均37.27+1.5岁。；肌瘤包膜外组：取自肌瘤组同一患者的子宫肌瘤包膜外2cm子宫肌层组织30例，患者年龄同肌瘤组；正常子宫肌层组：取正常子宫肌层组织10例，患者年龄35 ～ 40岁，平均37.40+1.5岁。标本均经术后病理确诊。排除内分泌干扰因素，即：手术时间为患者月经周期的第8-14天，手术前6个月未服用激素类药物，亦无糖尿病，甲状腺功能亢进或减低，卵巢肿瘤等并发症。
1.1.2 主要试剂 兔抗人ERα多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，S-P免疫组化试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司（通用型）。
1.2方法
1.2.1 免疫组化S-P 法染色 取子宫肌瘤结节组织的标本30例 ，选取同一患者子宫肌瘤包膜外2厘米正常子宫肌层组织30例，选取正常子宫肌层组织10例。标本取材后，常规用10%的甲醛溶液固定12-24小时，石蜡包埋。切4um厚的石蜡切片，HE染色后光镜下观察组织学形态，筛选组织标本。采用 S-P免疫组化法 ，检测标本中 ERα 的表达情况。
1.2.2结果判定 各个受体细胞核内或细胞浆内有棕黄色颗粒染色者为阳性染色细胞，阳性判断采用Sinicrope改良法[4] 。记录各级切片中染色细胞的百分数，分为5级： 0分：染色细胞<5%： 1分：染色细胞5%～25%； 2分：染色细胞25%～50%； 3分：染色细胞50 ～-75%； 4分：染色细胞>75%。染色强度分为4级，0分：不显色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：深棕色。每份切片记分=染色细胞计数分数×染色强度分数，所得分数<1分为阴性结果，反之为阳性，2-3分为弱阳性（+），4-5分为中度阳性（十十），>5分为强阳性（+++）。 每张切片取连续10个高倍视野观察评分后取值。
1.2.3统计学方法
采用spss11.0软件包对实验数据进行统计学处理。阳性率比较及相关性采用x2检验和spearman等级相关分析。 P<0. 05为差别有统计学意义，P<0. 01极显著性意义。
2 实验结果
30例子宫肌瘤组织中29例阳性表达（ 29/30），30例肌瘤包膜外正常肌层组织中21例阳性表达（21/30）， 10例正常子宫肌层组织中7例阳性表达（ 7/10） 。三种组织ERα蛋白阳性率比较有非常显著性差异（x 2=8.06， P =0.004）； 子宫肌瘤与肌瘤包膜外肌层组ERα蛋白阳性率比较有非常显著性差异（x 2=7.68， P =0.008）； 子宫肌瘤组与正常子宫肌层组ERα蛋白阳性率比较有显著性差异（x 2=5.92， P =0.018）； 肌瘤包膜外肌层组与正常子宫肌层组ERα蛋白阳性率比较无显著性差异（x 2=0.16，P =0.721）； 见表
3 讨论 子宫肌瘤作为妇科最常见的良性肿瘤，对其病因的研究至今尚无定论。但目前普遍认为：子宫肌瘤是一种卵巢激素依赖性肿瘤， 其生长与雌激素、孕激素、雄激素、催乳素等内分泌激素有关，并且受到局部多肽类生长因子的介导。但应用激素疗法及选择性使用激素受体调节剂及生长因子调节剂，均不能彻底治愈子宫肌瘤，因此提示还有其他因素参与子宫肌瘤的发生。
一般认为，雌激素通过雌激素受体（ER）信号转导途径发挥生理作用，即雌激素与ER 结合成 ER二聚体，二聚体继而与靶基因的雌激素反应元件（ERE）结合，从而激活或抑制靶基因的表达而引发一系列的生物学效应。 本次检测表明：子宫肌瘤组织ERα 蛋白含量明显高于肌瘤包膜外肌层组织（P<0.05），且也明显高于正常肌层组织组 （P<0.05），可见子宫肌瘤患者的瘤体组织ERα的含量增加，且ERα在子宫肌瘤组织中表达阳性率较高，推测子宫肌瘤的发生与ERα水平升高有关，并且ERα在其中可能起主要作用。 综上所述，在子宫肌瘤发展过程中， ERα对子宫肌瘤的表达发挥促进作用 。
参考文献：
[1] 许争峰，王迅美1 子宫平滑肌瘤细胞遗传学初步研究 中华妇产科杂志，1993 ，28 （2） ：91
[2] Kurbanora MKH ，Koroleva AG， sergeer AS1 Genetic cepidemiolgic analysis of uterine myoma：assessment of repeated risk ，Genetika，2003，25：1896-1898
[3] 吴际，段云程 子宫肌瘤组织雌、孕激素受体及细胞增殖相关抗原与激素及细胞核体关系的探讨 中华妇产科杂志2005 ，30（9） ：603
【关键词】ERα；免疫组化；肌瘤组织；肌层组织
【中图分类号】R737.33 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0034—01
子宫肌瘤是妇科最常见的良性肿瘤，生育期妇女其发病率约为20%～25%，占女性生殖器良性肿瘤的52%。长期以来关于子宫肌瘤病因的研究颇多，确切发病机制不清。目前为止， 一般认为雌激素有诱发并促进子宫肌瘤生长的作用，近来研究表明孕激素对子宫肌瘤更有促生长作用[1， 2]。雌、孕激素的生理作用分别由雌、孕激素受体介导。 雌激素受体分为α和β两种亚型[3] ，由两个独立的基因编码。 ERα和ERβ具有不同的调节基因转录的活性，最终发挥不同的临床作用。
1 实验材料与方法
1.1 材料
1.1.1實验对象 为2012年5月-2012年12月在沈阳市红十字会医院因子宫肌瘤行子宫切除术的30例患者和因宫颈CINⅢ级或子宫脱垂行子宫切除术的10例患者的石蜡组织标本。肌瘤组：取子宫肌瘤结节中心部位组织30例，患者年龄35 ～ 40岁，平均37.27+1.5岁。；肌瘤包膜外组：取自肌瘤组同一患者的子宫肌瘤包膜外2cm子宫肌层组织30例，患者年龄同肌瘤组；正常子宫肌层组：取正常子宫肌层组织10例，患者年龄35 ～ 40岁，平均37.40+1.5岁。标本均经术后病理确诊。排除内分泌干扰因素，即：手术时间为患者月经周期的第8-14天，手术前6个月未服用激素类药物，亦无糖尿病，甲状腺功能亢进或减低，卵巢肿瘤等并发症。
1.1.2 主要试剂 兔抗人ERα多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，S-P免疫组化试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司（通用型）。
1.2方法
1.2.1 免疫组化S-P 法染色 取子宫肌瘤结节组织的标本30例 ，选取同一患者子宫肌瘤包膜外2厘米正常子宫肌层组织30例，选取正常子宫肌层组织10例。标本取材后，常规用10%的甲醛溶液固定12-24小时，石蜡包埋。切4um厚的石蜡切片，HE染色后光镜下观察组织学形态，筛选组织标本。采用 S-P免疫组化法 ，检测标本中 ERα 的表达情况。
1.2.2结果判定 各个受体细胞核内或细胞浆内有棕黄色颗粒染色者为阳性染色细胞，阳性判断采用Sinicrope改良法[4] 。记录各级切片中染色细胞的百分数，分为5级： 0分：染色细胞<5%： 1分：染色细胞5%～25%； 2分：染色细胞25%～50%； 3分：染色细胞50 ～-75%； 4分：染色细胞>75%。染色强度分为4级，0分：不显色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：深棕色。每份切片记分=染色细胞计数分数×染色强度分数，所得分数<1分为阴性结果，反之为阳性，2-3分为弱阳性（+），4-5分为中度阳性（十十），>5分为强阳性（+++）。 每张切片取连续10个高倍视野观察评分后取值。
1.2.3统计学方法
采用spss11.0软件包对实验数据进行统计学处理。阳性率比较及相关性采用x2检验和spearman等级相关分析。 P<0. 05为差别有统计学意义，P<0. 01极显著性意义。
2 实验结果
30例子宫肌瘤组织中29例阳性表达（ 29/30），30例肌瘤包膜外正常肌层组织中21例阳性表达（21/30）， 10例正常子宫肌层组织中7例阳性表达（ 7/10） 。三种组织ERα蛋白阳性率比较有非常显著性差异（x 2=8.06， P =0.004）； 子宫肌瘤与肌瘤包膜外肌层组ERα蛋白阳性率比较有非常显著性差异（x 2=7.68， P =0.008）； 子宫肌瘤组与正常子宫肌层组ERα蛋白阳性率比较有显著性差异（x 2=5.92， P =0.018）； 肌瘤包膜外肌层组与正常子宫肌层组ERα蛋白阳性率比较无显著性差异（x 2=0.16，P =0.721）； 见表
3 讨论 子宫肌瘤作为妇科最常见的良性肿瘤，对其病因的研究至今尚无定论。但目前普遍认为：子宫肌瘤是一种卵巢激素依赖性肿瘤， 其生长与雌激素、孕激素、雄激素、催乳素等内分泌激素有关，并且受到局部多肽类生长因子的介导。但应用激素疗法及选择性使用激素受体调节剂及生长因子调节剂，均不能彻底治愈子宫肌瘤，因此提示还有其他因素参与子宫肌瘤的发生。
一般认为，雌激素通过雌激素受体（ER）信号转导途径发挥生理作用，即雌激素与ER 结合成 ER二聚体，二聚体继而与靶基因的雌激素反应元件（ERE）结合，从而激活或抑制靶基因的表达而引发一系列的生物学效应。 本次检测表明：子宫肌瘤组织ERα 蛋白含量明显高于肌瘤包膜外肌层组织（P<0.05），且也明显高于正常肌层组织组 （P<0.05），可见子宫肌瘤患者的瘤体组织ERα的含量增加，且ERα在子宫肌瘤组织中表达阳性率较高，推测子宫肌瘤的发生与ERα水平升高有关，并且ERα在其中可能起主要作用。 综上所述，在子宫肌瘤发展过程中， ERα对子宫肌瘤的表达发挥促进作用 。
参考文献：
[1] 许争峰，王迅美1 子宫平滑肌瘤细胞遗传学初步研究 中华妇产科杂志，1993 ，28 （2） ：91
[2] Kurbanora MKH ，Koroleva AG， sergeer AS1 Genetic cepidemiolgic analysis of uterine myoma：assessment of repeated risk ，Genetika，2003，25：1896-1898
[3] 吴际，段云程 子宫肌瘤组织雌、孕激素受体及细胞增殖相关抗原与激素及细胞核体关系的探讨 中华妇产科杂志2005 ，30（9） ：603