【摘 要】
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目的:观察肾气丸对NRK细胞水通道蛋白2(AQP2)表达的影响,探讨肾气丸在NRK细胞"V2RcAMP-PKA-AQP2"通路上的主要作用环节。方法:首先采用H-89、SQ22536、Tolvaptan分别抑制蛋白
【机 构】
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浙江中医药大学; 诸暨市中医医院; 浙江中医药大学附属第一医院; 杭州医学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.81673839,No.81373507,No.81173143);浙江省自然科学基金项目(No.LQ16H280002);浙江省中医药管理局项目(No.2015ZA073);浙江中医药大学校级科研基金项目(No.ZY201723)~~
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目的:观察肾气丸对NRK细胞水通道蛋白2(AQP2)表达的影响,探讨肾气丸在NRK细胞"V2RcAMP-PKA-AQP2"通路上的主要作用环节。方法:首先采用H-89、SQ22536、Tolvaptan分别抑制蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷(cAMP)及V2R,再合用cAMP抑制剂SQ22536与PKA激动剂8-Br-cAMP干预NRK细胞,通过qPCR法和Western Blot法观察NRK细胞AQP2 mRNA表达水平及AQP2、p-PKA蛋白表达的变化。结果:10%肾气丸含药血清能显著上调NRK细胞AQP2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01,P<0.05),加入PKA抑制剂H-89、cAMP抑制剂SQ22536或V2R拮抗剂Tolvaptan后,10%肾气丸含药血清促进AQP2、p-PKA表达的作用被显著抑制(P<0.01,P<0.05);SQ22536能显著抑制p-PKA、p-AQP2蛋白的表达(P<0.05),加入肾气丸含药血清或PKA激动剂8-BrcAMP后,p-PKA、p-AQP2蛋白表达均显著上调(P<0.01,P<0.05)。结论:V2R和PKA可能是肾气丸上调NRK细胞AQP2表达的重要靶点。
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