【摘 要】
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目的建立丙型肝炎病毒(HCV)解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物。方法应用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所; 北京工业大学生命科学与生物工程学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金优秀青年科学基金项目(No.81322050);教育部新世纪优秀人才项目(No.NCET-12-0072);中国医学科学院北京协和医学院协和学者特聘教授项目(2016)
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目的建立丙型肝炎病毒(HCV)解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物。方法应用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的解旋酶活性,并对反应温度、反应缓冲液pH、解旋酶浓度、底物浓度、ATP浓度等反应条件进行优化,建立筛选模型优化反应体系,通过Doxorubicin对反应体系进行验证。结果优化的解旋酶模型测定反应体系和条件为:反应温度为22℃,反应缓冲液pH值为7,酶浓度为5μg/ml,底物浓度为5nmol/L,ATP浓度为2.5mmol/L。用优化的FRET测得2μmol/L Doxorubicin对解旋酶的抑制率为(59.1±17.4)%。结论建立了HCV解旋酶抑制剂FRET法高通量筛选模型,为新型HCV NS3解旋酶抑制剂的研发奠定了基础。
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