【摘 要】
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目的构建人瘦素因子(Leptin)的原核表达质粒pGEX-4T-3-LEP,并诱导该基因在原核细胞中大量表达.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和DNA重组技术,从人皮肤成纤维细胞内将编
【机 构】
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北京,兰州大学基础医学院病理教研室
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目的构建人瘦素因子(Leptin)的原核表达质粒pGEX-4T-3-LEP,并诱导该基因在原核细胞中大量表达.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和DNA重组技术,从人皮肤成纤维细胞内将编码人Leptin的cDNA序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-3上,选取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序.同时应用SDS-PAGE和蛋白质印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定.结果克隆出的Leptin基因的cDNA由469bp组成,包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有Letinp基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3在DH5α细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,Leptin基因的表达量增加,重组Leptin蛋白主要存在于包涵体中.结论Leptin基因可以在原核细胞中获得表达,为深入研究该蛋白在创伤愈合中的具体作用奠定了基础.
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