探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。
方法采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象，将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞，筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果；荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化；采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化，Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化；MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。
结果荧光图像及基因和蛋白表达分析证实，首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin，同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果，但与对照细胞相比，M63细胞凋亡率仍明显上升，自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%，增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外，Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达，相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱，但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组，最高达56.33%±1.95%。
结论同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖，并利用HSP70诱导的CTL，增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。