论文部分内容阅读
[摘要] 目的 比较三种灵芝（霍芝1号、韩芝、日芝）不同药用部位的总多糖、总三萜、灵芝酸A及灵芝酸B的含量差异，为全面评价灵芝药材及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。 方法 采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量；香草醛-冰乙酸-高氯酸显色法测定总三萜的含量；HPLC法测定灵芝酸A、B的含量。 结果 每种灵芝不同药用部位的总多糖含量由高到低依次为：孢子粉>菌盖>菌柄；每种灵芝不同药用部位的总三萜含量由高到低依次为：菌盖>菌柄>孢子粉；每种灵芝不同药用部位的灵芝酸A和灵芝酸B含量由高到低依次为：菌盖>菌柄>孢子粉，且灵芝酸A的含量均明显高于灵芝酸B。 结论 该研究为全面评价灵芝子实体及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。
[关键词]灵芝；药用部位；总多糖；总三萜；灵芝酸
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）21-33-04
灵芝（Ganoderma lucidium）属担子菌门多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，是常用的滋补强壮、扶正固本中药，在中国有着悠久的药用历史。多糖和三萜类化合物是灵芝子实体及孢子粉的主要活性成分[1]。其中，灵芝多糖具有提高机体免疫能力、抗肿瘤[2]、抗癌症、抗衰老、调节血脂等药理活性，灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤、抗HIV-1型病毒、护肝、解毒和改善记忆等活性[3-6]。从药学的角度来看，多糖和三萜类化合物含量的高低可以作为评价灵芝药用价值和品质的重要依据。灵芝由菌盖、菌柄和孢子组成，这3个部位在灵芝不同的生长阶段起着不同的功能作用，其活性成分含量也必然存在一定的差异。因此，本研究对3种灵芝不同药用部位的总多糖、总三萜及主要三萜酸类成分灵芝酸A和灵芝酸B进行含量测定，为灵芝质量评价及开发利用提供科学的依据。
1 材料、仪器及试剂
霍芝1号、韩芝和日芝子实体及孢子粉采自安徽霍山县（位于北纬31°03′-31°33′，东经115°52′-116°32′之间）灵芝种植基地，由安徽衡济堂灵芝产业开发有限公司提供。将霍芝1号、韩芝、日芝子实体用清水洗净后晾干，将其分为菌盖和菌柄两部分与孢子粉于50℃烘干，菌盖及菌柄分别粉碎后备用。
KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AB265-S/10万电子天平（梅特勒-托利公司）；TU-1900型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；美国Waters型高效液相色谱仪；标准品灵芝酸A，灵芝酸B（上海同田生化技术有限公司提供，纯度均在98%以上）；齐墩果酸及葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所）；乙腈（色谱纯）；重蒸馏水；氯仿、硫酸甲酸、石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、无水甲醇等试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 总多糖含量测定
2.1.1 标准曲线制作 精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品5mg，加水溶解并定容至50mL，即得浓度为0.1mg/mL的对照品溶液。分别精密量取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于15mL具塞试管中，加水至2.0mL，再加入1mL 5%苯酚和5.0mL浓硫酸，摇匀，置于沸水中水浴20min，取出冰浴冷却10min，以相应的试剂为空白对照。在490nm处测定吸收度，以葡萄糖的质量（μg）为横坐标，以吸收度为纵坐标，得标准曲线Y=0.0064x+0.0071，R2=0.9991。
2.1.2 供试品溶液制备及含量测定 取样品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90mL，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取10mL，加入乙醇150mL，摇匀，4℃放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液2mL，至15mL具塞试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入苯酚1mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量并计算含量。
由表1可知，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位总多糖含量高低均表现为：孢子粉>菌盖>菌柄，其中孢子粉中总多糖含量明显高于菌盖和菌柄中总多糖含量。不同灵芝的菌盖中总多糖含量高低依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；不同灵芝的菌柄中总多糖含量高低依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；不同灵芝的孢子粉中总多糖含量高低依次是：日芝>霍芝1号>韩芝。见表1。
2.2 总三萜含量测定
2.2.1 标准曲线制作 精密称取齐墩果酸对照品13.65mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解定容至刻度，得0.273mg/mL齐墩果酸对照品溶液。精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL于15mL具塞试管中，随行试剂做空白对照，沸水浴中挥干溶剂，加入新鲜配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.4mL，高氯酸1.6mL，迅速用混合仪混匀溶液。然后将试管置于70℃水浴加热15min，拿出冷却至室温。加入8mL乙酸乙酯并混匀溶液，于560nm处测定吸光度。以齐墩果酸的质量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，得标准曲线Y=0.0050X-0.0257，R2=0.9997。
2.2.2 供试品溶液制备及三萜含量测定 精确称取霍芝1号、韩芝、日芝菌盖、菌柄各3份，每份250mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇15mL；再精确称取霍芝1号、韩芝、日芝孢子粉，各3份，每份500mg置于50mL容量瓶中，加无水乙醇30mL。超声提取30min，定容至50mL，过滤即得供试品溶液。精密吸取1mL于15mL具塞试管中，按标准曲线项下操作测吸光度值并计算总三萜含量并计算含量。结果见表2。
由表2可知，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位总三萜含量高低均表现为：菌盖>菌柄>孢子粉，差异明显。不同灵芝的菌盖中总多糖含量高低依次是：日芝>霍芝1号>韩芝；不同灵芝的菌柄中总多糖含量高低依次是：韩芝>霍芝1号>日芝；不同灵芝的孢子粉中总多糖含量高低依次是：韩芝>霍芝1号>日芝。 2.3 灵芝酸A和灵芝酸B含量的测定
2.3.1 色谱条件 Kromasil 100-5C18色谱柱（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液；采用梯度洗脱，梯度洗脱条件；0～5min，27%～30%；乙腈：5～50min，30%；乙腈：50～60min，30%～35%；乙腈。柱温为25℃；流速：0.8mL/min；进样量10μL；检测波长254nm。色谱图见图1。
2.3.2 供试品溶液制备 精密称取菌盖及菌柄样品2g，加入50mL三氯甲烷，超声处理30min，取出放冷，滤过，滤液蒸干，残留物置10mL量瓶中，以甲醇溶解，并加至刻度，摇匀；精密称取菌盖及菌柄样品10g，加入250mL三氯甲烷，超声处理30min，取出放冷，滤过，滤液蒸干，残留物置2mL量瓶中，以甲醇溶解，并加至刻度，摇匀；以上溶液经0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.3.3 对照品溶液制备 精密称取适量灵芝酸A、灵芝酸 B对照品，分别置5mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，制成灵芝酸A、灵芝酸B对照品溶液，质量浓度分别为1.036mg/mL和0.964mg/mL的单一对照品储备液。精密吸取灵芝酸A储备液100μL和灵芝酸B对照品储备液500μL，用甲醇定容至5mL量瓶中，摇匀，制成灵芝酸A和灵芝酸B的混合对照品溶液，质量浓度分别为0.2072mg/mL和0.0964mg/mL。
2.3.4 方法学考察
2.3.4.1 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液2、4、8、10、20、50μL，注入高效液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定各成分的峰面积。以进样质量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得灵芝酸A和灵芝酸B的回归方程分别为：Y=1E+06X-47907，R2=0.9999，Y=1E+06X-27751，R2=1.0000。灵芝酸A和灵芝酸B分别在0.41～10.36μg和0.193～4.82μg范围内线性关系良好。
2.3.4.2 精密度试验 取灵芝酸A和灵芝酸B混合对照品溶液，按上述的色谱条件连续进样6次，每次进样10μL，计算灵芝酸 A和灵芝酸B峰面积的RSD值分别为1.93%和1.94%，表明仪器精密度良好。
2.3.4.3 重复性试验 精密称取霍山菌盖样品6份，按2.3.2项下方法制备供试品溶液并按照上述色谱条件测定，计算得样品中灵芝酸A和灵芝酸B的峰面积的RSD值分别为2.30%和1.81%，表明该方法的重复性良好。
2.3.4.4 稳定性试验 取样品溶液，按上述的色谱条件分别在0、2、4、8、12、24h进样，进样量为10μL，计算灵芝酸A和灵芝酸B峰面积的RSD分别为1.39%和0.92%，说明样品在24h内稳定。
2.3.4.5 回收率试验 精密称取已知含量的段霍芝1号菌盖粉末250mg 6份，分别精密加入灵芝酸A和灵芝酸B对照品混合溶液1.5mL，按照样品测定项下方法测定，计算回收率，结果见表3。
2.3.5 样品测定 取3种灵芝（霍芝1号、韩芝和日芝）菌盖、菌柄粉末及孢子粉，按2.3.2供试品溶液制备和2.3.1色谱条件项下方法操作进行分析，测定结果见表4。
从表4可以看出，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位的灵芝酸A和灵芝酸B的含量存在明显差异，含量高低均表现为：菌盖>菌柄>孢子粉，其中3种灵芝的孢子粉中未检出灵芝酸A和灵芝酸B成分，可能因含量普遍较低所致。
3 讨论
灵芝多糖、三萜类化合物是灵芝的主要活性成分，其含量是衡量其质量的重要指标。灵芝的菌盖、菌柄及孢子粉这3个部位在灵芝的生长发育过程中起着不同的功能和作用，这必然会影响活性成分的组成、结构、含量及药效等方面，
因此很有必要对灵芝不同药用部位的活性成分含量进行单独的研究。
灵芝多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖血脂、神经细胞保护等药理作用。在本研究中，霍芝1号、韩芝及日芝不同药用部位的多糖存在一定的差异。从总体上看，孢子粉总多糖含量明显高于菌盖及菌柄，菌盖总多糖略高于菌柄总多糖且差异不明显。因此，如果以获得多糖为目标，可以直接使用整个子实体作为原料。
灵芝酸类成分是灵芝中主要活性成分，是灵芝药效物质基础之一。本研究结果表明利用分光光度法及HPLC法得出的数据均显示3种灵芝的不同药用部位的三萜类化学成分含量规律一致，均表现为菌盖>菌柄>孢子粉，灵孢子粉中三萜类成分含量较低，尤其是HPLC法测定时，在3种灵芝的孢子粉中都没有检测到灵芝酸A和灵芝酸B，这些差异与药效的相关性尚不明确，但应可以部分反映其质量。因此，要以获得三萜类成分为指标，我们建议采用灵芝菌盖为材料。值得一提的是，与HPLC法相比分光光度法测得总三萜含量明显偏高。因此，在进行药材质量分析时应根据具体目的选取合理的方法。
在对3种灵芝相同药用部位总多糖含量比较发现，菌盖总多糖含量由高到低的灵芝依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；菌柄总多糖含量由高到低的灵芝依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；孢子粉总多糖含量由高到低的灵芝依次是：日芝>霍芝1号>韩芝。在对三种灵芝相同药用部位总三萜含量比较发现，菌盖总三萜含量由高到低的灵芝依次是：日芝>霍芝1号>韩芝；菌柄总三萜含量由高到低的灵芝依次是：韩芝>霍芝1号>日芝；孢子粉总三萜含量由高到低的灵芝依次是：韩芝>霍芝1号>日芝。在对三种灵芝相同药用部位灵芝酸A和灵芝酸B含量比较发现，菌盖及菌柄的灵芝酸A和灵芝酸B含量由高到低的灵芝依次是：霍芝1号>日芝>韩芝；孢子粉中未检测到这两种成分，无法进行比较。因此，从实际生产及灵芝的药用价值两方面考虑，我们建议首选霍芝1号进行种植培育。
[参考文献]
[1] 林志彬.灵芝的现代研究[M].北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1996：145-146.
[2] 李颖博，李宇华，王瑞.灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响[J].中国药理学通报，2008，24（2）：250-253.
[3] Mekkawy S，Meselhy M，Nakamura N.Anti- HIV-1 and anti-HIV-1 protease substances from Ganoderma lucidum[J].Phytochemistry，2007，9（6）：1651-1657.
[4] Dudhgaonkar S， Thyagarajan A，Sliva D.Suppression of the inflammatory response by triterpenes isolated from the mushroom Ganoderma lucidum[J].International Immunopharmacology，2009，9（11）：1272-1280.
[5] 马友龙，张学成，祁海艳，等.灵芝酸的研究进展[J].河北医学，2011，17（10）：1418-1420.
[6] Smina TP，Mathew J，Janardhanan KK，et al.Antioxidant activity and toxicity profile of total triterpenes isolated from Ganoderma lucidum（Fr.）P.Karst occurring in South India[J].Environmental toxicology and pharmacology，2011， 32：438-446.
（收稿日期：2013-08-20）
[关键词]灵芝；药用部位；总多糖；总三萜；灵芝酸
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）21-33-04
灵芝（Ganoderma lucidium）属担子菌门多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，是常用的滋补强壮、扶正固本中药，在中国有着悠久的药用历史。多糖和三萜类化合物是灵芝子实体及孢子粉的主要活性成分[1]。其中，灵芝多糖具有提高机体免疫能力、抗肿瘤[2]、抗癌症、抗衰老、调节血脂等药理活性，灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤、抗HIV-1型病毒、护肝、解毒和改善记忆等活性[3-6]。从药学的角度来看，多糖和三萜类化合物含量的高低可以作为评价灵芝药用价值和品质的重要依据。灵芝由菌盖、菌柄和孢子组成，这3个部位在灵芝不同的生长阶段起着不同的功能作用，其活性成分含量也必然存在一定的差异。因此，本研究对3种灵芝不同药用部位的总多糖、总三萜及主要三萜酸类成分灵芝酸A和灵芝酸B进行含量测定，为灵芝质量评价及开发利用提供科学的依据。
1 材料、仪器及试剂
霍芝1号、韩芝和日芝子实体及孢子粉采自安徽霍山县（位于北纬31°03′-31°33′，东经115°52′-116°32′之间）灵芝种植基地，由安徽衡济堂灵芝产业开发有限公司提供。将霍芝1号、韩芝、日芝子实体用清水洗净后晾干，将其分为菌盖和菌柄两部分与孢子粉于50℃烘干，菌盖及菌柄分别粉碎后备用。
KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AB265-S/10万电子天平（梅特勒-托利公司）；TU-1900型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；美国Waters型高效液相色谱仪；标准品灵芝酸A，灵芝酸B（上海同田生化技术有限公司提供，纯度均在98%以上）；齐墩果酸及葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所）；乙腈（色谱纯）；重蒸馏水；氯仿、硫酸甲酸、石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、无水甲醇等试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 总多糖含量测定
2.1.1 标准曲线制作 精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品5mg，加水溶解并定容至50mL，即得浓度为0.1mg/mL的对照品溶液。分别精密量取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于15mL具塞试管中，加水至2.0mL，再加入1mL 5%苯酚和5.0mL浓硫酸，摇匀，置于沸水中水浴20min，取出冰浴冷却10min，以相应的试剂为空白对照。在490nm处测定吸收度，以葡萄糖的质量（μg）为横坐标，以吸收度为纵坐标，得标准曲线Y=0.0064x+0.0071，R2=0.9991。
2.1.2 供试品溶液制备及含量测定 取样品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90mL，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取10mL，加入乙醇150mL，摇匀，4℃放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液2mL，至15mL具塞试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入苯酚1mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量并计算含量。
由表1可知，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位总多糖含量高低均表现为：孢子粉>菌盖>菌柄，其中孢子粉中总多糖含量明显高于菌盖和菌柄中总多糖含量。不同灵芝的菌盖中总多糖含量高低依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；不同灵芝的菌柄中总多糖含量高低依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；不同灵芝的孢子粉中总多糖含量高低依次是：日芝>霍芝1号>韩芝。见表1。
2.2 总三萜含量测定
2.2.1 标准曲线制作 精密称取齐墩果酸对照品13.65mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解定容至刻度，得0.273mg/mL齐墩果酸对照品溶液。精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL于15mL具塞试管中，随行试剂做空白对照，沸水浴中挥干溶剂，加入新鲜配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.4mL，高氯酸1.6mL，迅速用混合仪混匀溶液。然后将试管置于70℃水浴加热15min，拿出冷却至室温。加入8mL乙酸乙酯并混匀溶液，于560nm处测定吸光度。以齐墩果酸的质量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，得标准曲线Y=0.0050X-0.0257，R2=0.9997。
2.2.2 供试品溶液制备及三萜含量测定 精确称取霍芝1号、韩芝、日芝菌盖、菌柄各3份，每份250mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇15mL；再精确称取霍芝1号、韩芝、日芝孢子粉，各3份，每份500mg置于50mL容量瓶中，加无水乙醇30mL。超声提取30min，定容至50mL，过滤即得供试品溶液。精密吸取1mL于15mL具塞试管中，按标准曲线项下操作测吸光度值并计算总三萜含量并计算含量。结果见表2。
由表2可知，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位总三萜含量高低均表现为：菌盖>菌柄>孢子粉，差异明显。不同灵芝的菌盖中总多糖含量高低依次是：日芝>霍芝1号>韩芝；不同灵芝的菌柄中总多糖含量高低依次是：韩芝>霍芝1号>日芝；不同灵芝的孢子粉中总多糖含量高低依次是：韩芝>霍芝1号>日芝。 2.3 灵芝酸A和灵芝酸B含量的测定
2.3.1 色谱条件 Kromasil 100-5C18色谱柱（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液；采用梯度洗脱，梯度洗脱条件；0～5min，27%～30%；乙腈：5～50min，30%；乙腈：50～60min，30%～35%；乙腈。柱温为25℃；流速：0.8mL/min；进样量10μL；检测波长254nm。色谱图见图1。
2.3.2 供试品溶液制备 精密称取菌盖及菌柄样品2g，加入50mL三氯甲烷，超声处理30min，取出放冷，滤过，滤液蒸干，残留物置10mL量瓶中，以甲醇溶解，并加至刻度，摇匀；精密称取菌盖及菌柄样品10g，加入250mL三氯甲烷，超声处理30min，取出放冷，滤过，滤液蒸干，残留物置2mL量瓶中，以甲醇溶解，并加至刻度，摇匀；以上溶液经0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.3.3 对照品溶液制备 精密称取适量灵芝酸A、灵芝酸 B对照品，分别置5mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，制成灵芝酸A、灵芝酸B对照品溶液，质量浓度分别为1.036mg/mL和0.964mg/mL的单一对照品储备液。精密吸取灵芝酸A储备液100μL和灵芝酸B对照品储备液500μL，用甲醇定容至5mL量瓶中，摇匀，制成灵芝酸A和灵芝酸B的混合对照品溶液，质量浓度分别为0.2072mg/mL和0.0964mg/mL。
2.3.4 方法学考察
2.3.4.1 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液2、4、8、10、20、50μL，注入高效液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定各成分的峰面积。以进样质量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得灵芝酸A和灵芝酸B的回归方程分别为：Y=1E+06X-47907，R2=0.9999，Y=1E+06X-27751，R2=1.0000。灵芝酸A和灵芝酸B分别在0.41～10.36μg和0.193～4.82μg范围内线性关系良好。
2.3.4.2 精密度试验 取灵芝酸A和灵芝酸B混合对照品溶液，按上述的色谱条件连续进样6次，每次进样10μL，计算灵芝酸 A和灵芝酸B峰面积的RSD值分别为1.93%和1.94%，表明仪器精密度良好。
2.3.4.3 重复性试验 精密称取霍山菌盖样品6份，按2.3.2项下方法制备供试品溶液并按照上述色谱条件测定，计算得样品中灵芝酸A和灵芝酸B的峰面积的RSD值分别为2.30%和1.81%，表明该方法的重复性良好。
2.3.4.4 稳定性试验 取样品溶液，按上述的色谱条件分别在0、2、4、8、12、24h进样，进样量为10μL，计算灵芝酸A和灵芝酸B峰面积的RSD分别为1.39%和0.92%，说明样品在24h内稳定。
2.3.4.5 回收率试验 精密称取已知含量的段霍芝1号菌盖粉末250mg 6份，分别精密加入灵芝酸A和灵芝酸B对照品混合溶液1.5mL，按照样品测定项下方法测定，计算回收率，结果见表3。
2.3.5 样品测定 取3种灵芝（霍芝1号、韩芝和日芝）菌盖、菌柄粉末及孢子粉，按2.3.2供试品溶液制备和2.3.1色谱条件项下方法操作进行分析，测定结果见表4。
从表4可以看出，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位的灵芝酸A和灵芝酸B的含量存在明显差异，含量高低均表现为：菌盖>菌柄>孢子粉，其中3种灵芝的孢子粉中未检出灵芝酸A和灵芝酸B成分，可能因含量普遍较低所致。
3 讨论
灵芝多糖、三萜类化合物是灵芝的主要活性成分，其含量是衡量其质量的重要指标。灵芝的菌盖、菌柄及孢子粉这3个部位在灵芝的生长发育过程中起着不同的功能和作用，这必然会影响活性成分的组成、结构、含量及药效等方面，
因此很有必要对灵芝不同药用部位的活性成分含量进行单独的研究。
灵芝多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖血脂、神经细胞保护等药理作用。在本研究中，霍芝1号、韩芝及日芝不同药用部位的多糖存在一定的差异。从总体上看，孢子粉总多糖含量明显高于菌盖及菌柄，菌盖总多糖略高于菌柄总多糖且差异不明显。因此，如果以获得多糖为目标，可以直接使用整个子实体作为原料。
灵芝酸类成分是灵芝中主要活性成分，是灵芝药效物质基础之一。本研究结果表明利用分光光度法及HPLC法得出的数据均显示3种灵芝的不同药用部位的三萜类化学成分含量规律一致，均表现为菌盖>菌柄>孢子粉，灵孢子粉中三萜类成分含量较低，尤其是HPLC法测定时，在3种灵芝的孢子粉中都没有检测到灵芝酸A和灵芝酸B，这些差异与药效的相关性尚不明确，但应可以部分反映其质量。因此，要以获得三萜类成分为指标，我们建议采用灵芝菌盖为材料。值得一提的是，与HPLC法相比分光光度法测得总三萜含量明显偏高。因此，在进行药材质量分析时应根据具体目的选取合理的方法。
在对3种灵芝相同药用部位总多糖含量比较发现，菌盖总多糖含量由高到低的灵芝依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；菌柄总多糖含量由高到低的灵芝依次是：霍芝1号>韩芝>日芝；孢子粉总多糖含量由高到低的灵芝依次是：日芝>霍芝1号>韩芝。在对三种灵芝相同药用部位总三萜含量比较发现，菌盖总三萜含量由高到低的灵芝依次是：日芝>霍芝1号>韩芝；菌柄总三萜含量由高到低的灵芝依次是：韩芝>霍芝1号>日芝；孢子粉总三萜含量由高到低的灵芝依次是：韩芝>霍芝1号>日芝。在对三种灵芝相同药用部位灵芝酸A和灵芝酸B含量比较发现，菌盖及菌柄的灵芝酸A和灵芝酸B含量由高到低的灵芝依次是：霍芝1号>日芝>韩芝；孢子粉中未检测到这两种成分，无法进行比较。因此，从实际生产及灵芝的药用价值两方面考虑，我们建议首选霍芝1号进行种植培育。
[参考文献]
[1] 林志彬.灵芝的现代研究[M].北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1996：145-146.
[2] 李颖博，李宇华，王瑞.灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响[J].中国药理学通报，2008，24（2）：250-253.
[3] Mekkawy S，Meselhy M，Nakamura N.Anti- HIV-1 and anti-HIV-1 protease substances from Ganoderma lucidum[J].Phytochemistry，2007，9（6）：1651-1657.
[4] Dudhgaonkar S， Thyagarajan A，Sliva D.Suppression of the inflammatory response by triterpenes isolated from the mushroom Ganoderma lucidum[J].International Immunopharmacology，2009，9（11）：1272-1280.
[5] 马友龙，张学成，祁海艳，等.灵芝酸的研究进展[J].河北医学，2011，17（10）：1418-1420.
[6] Smina TP，Mathew J，Janardhanan KK，et al.Antioxidant activity and toxicity profile of total triterpenes isolated from Ganoderma lucidum（Fr.）P.Karst occurring in South India[J].Environmental toxicology and pharmacology，2011， 32：438-446.
（收稿日期：2013-08-20）