论文部分内容阅读
目的构建人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒Ad．HIF-1α，并观察其对人肺腺癌细胞SPCA-1的影响。方法采用酶切、连接、转化等方法，利用AdEasy系统构建插入HIF-1α RNAi片段的重组腺病毒Ad．HIF-1α。氯化铯梯度离心法纯化病毒。病毒功能滴度采用传导293细胞的方法，以2MOI Ad．HIF1α传导SPCA-1细胞，48h后应用流式细胞术检测绿色荧光蛋白（GFP）表达和HIF-1α蛋白表达。HIF-1α mRNA表达用荧光定量PCR检测。结果酶切和卡那霉素抗性筛选证实，重组穿梭载体pA