【摘 要】
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目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法 应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC
【机 构】
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100020,北京,首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心,中国医学科学院基础医学研究所,100020,北京,首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心,100020,北京,首都医科大学附属北
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目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法 应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC)和Tm(melting temperature)值分析.PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α4.2,-α3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测.结果 检测-α4.2和-α3.7的PCR产物长度分别为1.65 kb、1.9 kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×102个拷贝、4.3×102个拷贝.该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍.结论 SYBR-Green1实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm 分析可以灵敏、准确地检测-α4.2、-α3.7、αα(包括αTα)及--SEA 4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断.该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用。
其他文献
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例1 女,8个月,因"反应较同龄儿差,疑为智力低下"来我院检查.查体无异常.患儿为第1胎足月顺产.父母体健,否认有家族遗传病史。
目的 观察肺癌DNA异倍体与P16蛋白表达,探讨流式细胞术(flow cytometry, FCM)在检测肺癌遗传不稳定性和恶性度中的应用.方法 CD45、P16荧光标记抗体同步标记穿刺标本中血细胞、肿瘤细胞,FCM测定CD45+ P16+和CD45- P16+的细胞比率并进行比较;检测肺穿刺标本细胞DNA含量.结果 (1)74份恶性肿瘤中,异倍体肿瘤占62.2%(46份).50%肺癌出现P16蛋
先证者(Ⅲ9) 女,28岁,未婚.因"全身多发色斑及囊性肿块20余年"于2004年6月17日来我科就诊.患者2岁时面、颈、腹部出现散在淡褐色斑点,10岁时胸背部开始有囊性小肿块,无痛痒.以后随年龄增长皮疹增多变大,除掌跖外几乎累及全身。
1 对象与方法 1.1 对象患者组168例均系我院住院的精神分裂症患者,其中男性132例、女性36例,年龄16～56岁,平均年龄29.24岁,其中16～25岁74例(44%),26～35岁58例(34.5%),36～45岁24例(14.3%),46岁以上12例(7.1%).病程:一年以内39例(23.2%),1～5年62例(36.9%),6～10年39例(23.2%),11～15年12例(7.1
患者女, 29 岁,结婚 5 年,怀孕3次,均在孕70～90 d自然流产.妇科检查未见异常.怀孕期间无感冒史、服药史.夫妻双方体健,无药物及毒物接触史,表型、智力正常,非近亲结婚。
目的 探讨X-连锁肾上腺脑白质营养不良(adrenoleukodystrophy,ALD)产前诊断的方法.方法 应用气相色谱-质谱联用法对17例ALD高危孕妇进行了18次羊水细胞中极长链脂肪酸(very long chain fatty acids,VLCFAs)水平测定,其中8例胎儿出生后或引产后进行了血浆VLCFAs水平检测.应用PCR和测序方法对8例胎儿羊水细胞或生后外周血细胞DNA进行了基
目的 研究伴胰岛素抵抗2型糖尿病大鼠与正常大鼠内脏脂肪组织基因表达的差异.方法 Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠22只,实验组[小剂量链脲佐菌素(2 mg/kg)加高脂饲料]12只,对照组(常规饲料)10只.从脂肪组织中抽取总RNA,纯化mRNA并逆转录为cDNA,Cy5标记实验组cDNA,Cy3标记对照组cDNA,获得两组动物来源的cDNA探针.cDNA探针与基因表达谱芯片杂交,结果