HPLC法测定急性淋巴细胞白血病患儿血清中甲氨蝶呤浓度

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目的:建立以高效液相色谱法测定急性淋巴细胞白血病患儿血清中甲氨蝶呤浓度的方法。方法:急性淋巴细胞白血病患儿在开始静脉滴注大剂量甲氨蝶呤后24、44、68h时采集血样。血清经高氯酸沉淀蛋白高速离心后,取上清液进样分析。色谱柱为Synergi-4u Fusion-RP80A,流动相为磷酸盐缓冲液(pH6·8)-甲醇(78∶22),流速为0·8mL·min-1,紫外检测波长为306nm,柱温为30℃。结果:甲氨蝶呤检测浓度在0·05~2·50μmol·L-1(r=0·9991)和2·50~100·0μmol·L-1(r=0·9998)范围内线性关系良好。日内、日间RSD分别为(4·09±1·69)%、(4·21±1·27)%;平均方法回收率为(99·86±1·38)%,平均提取回收率为(68·85±1·46)%;最低定量限为0·05μmol·L-1。20例患儿24、44、68h时血清甲氨蝶呤平均浓度分别为(38·2±10·7)、(0·46±0·36)、(0·10±0·07)μmol·L-1。结论:本方法采样量小,操作简便,测定结果准确可靠,适用于临床甲氨蝶呤的血药浓度监测。
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