【摘 要】
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目的 探讨WNK4(With No K=lysine)基因在鼠肾皮质集合管细胞(M1)中的表达位置和生理作用.方法 构建PCSPT-mWNK4-kxx质粒,瞬时转染M1细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的W
【机 构】
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中南大学湘雅二医院肾内科,湖南,长沙,410011;美国南加州大学Keck医学院肾脏分子生理研究室
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目的 探讨WNK4(With No K=lysine)基因在鼠肾皮质集合管细胞(M1)中的表达位置和生理作用.方法 构建PCSPT-mWNK4-kxx质粒,瞬时转染M1细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的WNK4基因在M1细胞中表达位置.构建PTrepWNK4质粒,转染M1Tet-Off细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的WNK4基因在稳定转染M1Tet-Off细胞中表达位置,采用免疫沉淀和Western blot检测WNK4蛋白质表达,采用电压计检测WNK4基因过表达对M1单层细胞跨上皮电阻(TER)的作用.结果 瞬时转染野生型WNK4基因,其蛋白质主要在M1细胞的胞膜表达,部分在胞浆.在稳定转染的M1Tet-Off细胞株,野生型WNK4基因表达于细胞的胞膜,免疫沉淀和Western blot结果显示Myc抗原标记的野生型WNK4蛋白在M1 Tet-Off细胞中表达.电生理研究显示野生型WNK4基因过表达显著降低M1单层细胞TER.结论 野生型鼠WNK4基因主要在M1细胞的胞膜表达,部分表达在胞浆.WNK4基因过表达降低单层细胞跨上皮电阻,增加相邻细胞的通透性,为进一步研究WNK4基因在高血压中的分子机制及其在肾脏的生理功能打下基础.
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