【摘 要】
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目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase.方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切
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目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase.方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性.结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性.结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物.
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