【摘 要】
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目的通过给予p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPKs)抑制剂(SB203580),探讨紫杉醇诱发细胞凋亡中p38MAPKs通路对γ-氨基丁酸B型受体(GABAB受体)表达变化的影响及其作用机制。方法随机选取原代培养5 d,浓度约为1×109/L的海马细胞,给予不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00μmol/L)紫杉醇,采用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测法分别检测海马神经元细胞
【机 构】
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目的通过给予p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPKs)抑制剂(SB203580),探讨紫杉醇诱发细胞凋亡中p38MAPKs通路对γ-氨基丁酸B型受体(GABAB受体)表达变化的影响及其作用机制。
方法随机选取原代培养5 d,浓度约为1×109/L的海马细胞,给予不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00μmol/L)紫杉醇,采用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测法分别检测海马神经元细胞抑制率(n= 3)及凋亡率(n= 4)变化,以此确定紫杉醇诱发细胞凋亡的最适浓度。另选取原代培养5 d的海马细胞随机分为4组:对照组(C组)、10μmol/L SB203580处理组(K组)、紫杉醇最适浓度处理组(N组)、10μmol/L SB203580+紫杉醇最适浓度混合组(K+ N组),培养时间为24 h,保持各组加液量一致,Western blot法测定海马细胞GABAB受体及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平(n= 3)。
结果紫杉醇对海马细胞活力的抑制具有时间和浓度的交互作用(F= 9.127,P< 0.05),根据MTT法(n= 3)和流式细胞仪法(n= 4)检测结果,各浓度紫杉醇处理24 h对海马神经元凋亡率的影响差异有统计学意义(F= 64.523,P< 0.05),并计算出紫杉醇诱发细胞凋亡的最适浓度为1μmol/L[早期凋亡率达(48.63±5.76)%]。蛋白表达结果显示(n= 3):与C组比较,N组和K+N组GABAB受体与NF-κB表达均明显增高(P< 0.05),而K组GABAB受体与NF-κB表达均降低(P< 0.05);与K组比较,N组和K+ N组NF-κB和GABAB受体表达均增高(P< 0.05);与N组比较,K+N组NF-κB和GABAB受体表达均降低(P< 0.05)。
结论在紫杉醇诱发细胞凋亡过程中,抑制p38MAPKs通路可上调GABAB受体表达,而其下游因子NF-κB可能是其调控GABAB受体表达变化的关键靶点。
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