丁酸钠对Hep-2细胞的生长抑制和诱导凋亡作用及其对端粒酶活性的影响

来源 :中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w56382955
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目的研究丁酸钠对Hep-2细胞的生长抑制和诱导凋亡作用及诱导凋亡过程中对端粒酶活性的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl terazolium,MTT)比色法观察不同浓度丁酸钠对Hep-2细胞的生长抑制作用,透射电镜下观察其形态学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick—end—labeling,TUNEL)法、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测丁酸钠作用后的细胞凋亡情况及细胞周期变化,端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocal,TRAP)-银染法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶各组分的mRNA表达情况。结果丁酸钠对Hep-2细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性。透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变。琼脂糖凝胶电泳可见特征性的凋亡细胞DNA梯状条带。TUNEL法显示,2.5mmol/L丁酸钠作用72h,细胞凋亡指数由作用前的2.27±1.18增加至33.50±2.75。流式细胞仪显示,2.5mmol/L丁酸钠作用72h,细胞凋亡率由作用前的2.86%增加至31.28%,G0/G1期细胞比例由50.38%增加至70.88%,S期细胞比例由27.40%减少至8.20%,细胞增殖指数由49.62%降低至29.12%。TRAP-银染法显示,丁酸钠作用后细胞端粒酶活性下降,且具有一定时间效应关系。RT-PCR显示端粒酶逆转录酶表达下降而端粒酶RNA模板和端粒酶相关蛋白表达无明显改变。结论丁酸钠对Hep-2细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,并可能通过下调端粒酶逆转录酶表达而抑制端粒酶活性。

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