【摘 要】
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将Tnl541转座子的红霉素抗性rRNA甲基化酶基因克隆至pUCl9的EcoO109 I位点 ,构建成能够确定乳酸菌质粒复制子所在片段的复制检测载体pUB380.将乳酸菌隐蔽性质粒pEV105 3个酶
【机 构】
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乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学,哈尔滨150030黑龙江大学生命科学学院,哈尔滨,150080;乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学,哈尔滨150030;
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将Tnl541转座子的红霉素抗性rRNA甲基化酶基因克隆至pUCl9的EcoO109 I位点 ,构建成能够确定乳酸菌质粒复制子所在片段的复制检测载体pUB380.将乳酸菌隐蔽性质粒pEV105 3个酶切片断(4.5、3.5、3 kb)分别连接至此载体,并电转化至原宿主菌.试验结果显示,连接了3.5 kb片段的栽体能够使原宿主菌表达红霉素抗性的片段,即复制子所在片段.以Southern杂交对质粒pEV105复制模式进行分析.结果显示pEV105为O型复制.用400μg/mL吖啶橙对菌株KLDS6.0718处理50代后没有质粒丢失,说明pEVl05在宿主菌内十分稳定.该复制子在构建乳酸菌食品级克隆表达载体中可作为稳定的复制子使用.
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