论文部分内容阅读
摘要： 以红醋栗不同组织部位为外植体，采用不同的消毒药剂、消毒方式及消毒时间对其进行试验研究，结果表明：红醋栗离体初代培养以半木质化茎段为外植体，消毒药剂为0.1%升汞（HgCL2）+2滴吐温溶液，通过手摇容器晃动的方式消毒8 min的试验效果最佳。
关键词： 红醋栗; 外植体消毒; 消毒方法; 诱导率
中图分类号： S 663. 9 文献标识码： A 文章編号：1001 - 9499（2021）03 - 0015 - 03
红醋栗（Ribes rubrum）系醋栗科、茶蘼子属、茶蘼亚属落叶小灌木，俗称红加仑，株高1～1.5 m，果实成熟为红色，成串着生在果枝上，可鲜食可加工，具有很高的经济价值。红醋栗树姿优美，果实颜色鲜艳，可作观赏树种应用于园林绿化。辽宁省干旱地区造林研究所于2002年从俄罗斯季米利亚泽夫农学院引进红醋栗，通过栽培试验，发现其具有耐寒、适应性强、果实产量高等特点，在辽西地区可安全越冬，不仅为辽西地区经济林树种结构调整提供了新的优良种质，并且在促进区域经济发展和环境美化方面都具有重要意义[ 1 - 2 ]。
目前，红醋栗仅限于在东北和西北地区栽培，存在栽植面积小、果实产量不稳定、相关产业发展缓慢、苗木供应不足等问题[ 3 ]。为了促进红醋栗规模化生产，短期内获得大量优质种苗，可采用组织培养方法。组织培养作为植物无性繁殖的一种方式，具有繁殖速度快、繁殖系数高等特点[ 4 - 7 ]。在组织培养中，外植体选择、消毒药剂种类、消毒方式及消毒时间是影响无菌体系建立的重要因素，初代培养成功与否直接关系到组培苗的成活率。本研究通过对红醋栗不同部位外植体消毒方法的消毒效果的影响研究，为红醋栗的组培快繁提供技术参考。
1 试验地概况
试验地设于辽宁省朝阳市建平县富山镇的良种红醋栗引种栽培基地。该地区为暖温带半湿润、半干旱气候，年均气温5.4～8.7 ℃，年均日照时数2 850～2 950 h，降水量450～580 mm，无霜期120～155天。
2 试验材料与方法
2. 1 试验材料
2020年6月中旬，于试验地采集若干当年生生长发育健壮、无病虫害的红醋栗同株幼嫩茎尖、半木质化茎段和木质化茎段作为外植体试验材料。
2. 2 试验方法
2. 2. 1 材料预处理
将采集回来的外植体剪成8 cm左右的茎段，剪掉叶片。流水冲洗后，用肥皂液浸泡5 min，然后用软毛刷刷掉表面尘土和杂物，用流水冲净肥皂液，置于自来水龙头下冲洗3～4 h后转入无菌室备用。
2. 2. 2 外植体消毒
采用L9（ 34 ）正交试验设计，选取外植体部位、消毒药剂种类、消毒方式及消毒时间这4个因素，每个因素各设3个水平，即外植体部位（幼嫩茎尖、半木质化茎段、木质化茎段），消毒药剂种类（75%酒精30 s+0.1%升汞、0.1%升汞、0.1%升汞+2滴吐温），消毒方式（静止浸泡、玻璃棒搅动、手摇容器晃动），消毒时间（6 min、8 min、10 min）（表1）。将备好的外植体茎段按照试验设计进行消毒处理，用无菌水冲洗5～6次，将冲洗干净、滤干水分的外植体在超净工作台上切成1 cm的带芽茎段，接种到初代培养固体培养基中，每个处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体，30天后统计诱导率。
诱导率（K）=诱导出不定芽的外植体数量/接种的外植体总数×100%
2. 2. 3 培养条件
以MS为基本培养基，附加激素6-BA0.6 mg/L+ IBA0.04 mg/L，活性炭AC1.0 g/L，蔗糖含量为33%，琼脂含量为0.8%，pH值调至5.8，置于121℃、1.1 kg/m2压力下高温灭菌20 min，培养室温度控制在（23±2）℃，空气相对湿度50%～60%，光照强度为2 000～4 000 lx，光照时间为14～16 h/d[ 4 ]。
3 结果与分析
3. 1 不同外植体消毒效果比较
将供试外植体部位按照不同消毒方法设置9个处理（表2）：（1）幼嫩茎尖，75%酒精30 s+0.1%升汞，静止浸泡6 min;（2）幼嫩茎尖，0.1%升汞，玻璃棒搅动8 min;（3）幼嫩茎尖，0.1%升汞+2滴吐温，手摇容器晃动10 min;（4）半木质化茎段，75%酒精30s+0.1%升汞，玻璃棒搅动10 min;（5）半木质化茎段，0.1%升汞，手摇容器晃动6 min;（6）半木质化茎段，0.1%升汞+2滴吐温，静止浸泡8 min;（7）木质化茎段，75%酒精30 s+0.1%升汞，手摇容器晃动8 min;（8）木质化茎段，0.1%升汞，静止浸泡10 min;（9）木质化茎段，0.1%升汞+2滴吐温，玻璃棒搅动6 min。
试验接种后，对组培苗进行观察和调查统计，并将污染的和消毒处理过程中杀死的组培苗及时清出培养室，30天后统计红醋栗离体初代培养的诱导率。由不同外植体消毒方法的正交试验结果（表2）可以看出，试验处理6的相对诱导率较好，为78.6%。
3. 2 数据分析
由各试验处理诱导结果（表3）可以看出，试验处理因素主次顺序是以极差值R的大小来衡量的，试验比较外植体部位对红醋栗离体初代培养成活率的影响最为明显，极差值R为28.0;其次是消毒药剂的种类，R值为10.6;再次是消毒时间和消毒方式，R值分别为9.8和6.5。 注： K为诱导率
4 结论与讨论
4. 1 控制污染、提高成活率是植物组织培养中的关键因素，外植体因其部位不同，细胞活力强弱及带菌多少存在差异，进而影响初代培养的污染程度。使用适宜的消毒药剂，掌握好消毒方式和消毒时间能够起到理想的灭菌作用。
4. 2 75%酒精具有很強的渗透力，不适用于幼嫩茎尖灭菌，而0.1%升汞作为组织培养中常用的消毒剂，结合吐温一起使用，能够促进药液与外植体表面组织接触，消毒效果更好。玻璃棒搅动消毒虽然污染较低，但在搅动过程中很可能对幼嫩外植体表面造成损伤，使药液渗入组织，进而对成活率产生一定影响。
4. 3 在进行红醋栗离体初代培养时，以半木质化茎段为外植体，以0.1%升汞+2滴吐温溶液为消毒药剂，再通过手摇容器晃动的方式消毒8 min的试验效果最佳。
参考文献
[1] 惠兴学. 俄罗斯红醋栗引种栽培技术[J]. 防护林科技， 2007（5）： 122 - 123.
[2] 兰士波. 红醋栗种质资源研究现状与展望[J]. 中国林副特产， 2018（1）： 83 - 86.
[3] 王洪江. 不同处理对红醋栗扦插育苗效果的影响[J]. 辽宁林业科技， 2018（6）： 24 - 26.
[4] 黄立华， 王占龙， 朱虹， 等. 红醋栗组培快繁技术研究[J].辽宁林业科技， 2012（6）： 15 - 17 + 24.
[5] 张海旺， 王洪江. 红醋栗无性繁殖技术研究[J]. 林业科技，2019， 44（5）： 28 - 32.
[6] 王洪江， 张海旺， 白锦曦， 王腊梅. 辽西地区红醋栗无性繁殖关键技术[J]. 辽宁林业科技， 2019（5）： 74 - 75 + 78.
[7] 马艳丽. 红醋栗水培扦插繁殖技术初步研究[J]. 林业科技，
2019， 44（2）： 26 - 27.
第1作者简介： 朱虹（1981-）， 女， 工程师， 主要从事苗木繁育工作。
收稿日期： 2021 - 01 - 16
（责任编辑： 王 岩）
关键词： 红醋栗; 外植体消毒; 消毒方法; 诱导率
中图分类号： S 663. 9 文献标识码： A 文章編号：1001 - 9499（2021）03 - 0015 - 03
红醋栗（Ribes rubrum）系醋栗科、茶蘼子属、茶蘼亚属落叶小灌木，俗称红加仑，株高1～1.5 m，果实成熟为红色，成串着生在果枝上，可鲜食可加工，具有很高的经济价值。红醋栗树姿优美，果实颜色鲜艳，可作观赏树种应用于园林绿化。辽宁省干旱地区造林研究所于2002年从俄罗斯季米利亚泽夫农学院引进红醋栗，通过栽培试验，发现其具有耐寒、适应性强、果实产量高等特点，在辽西地区可安全越冬，不仅为辽西地区经济林树种结构调整提供了新的优良种质，并且在促进区域经济发展和环境美化方面都具有重要意义[ 1 - 2 ]。
目前，红醋栗仅限于在东北和西北地区栽培，存在栽植面积小、果实产量不稳定、相关产业发展缓慢、苗木供应不足等问题[ 3 ]。为了促进红醋栗规模化生产，短期内获得大量优质种苗，可采用组织培养方法。组织培养作为植物无性繁殖的一种方式，具有繁殖速度快、繁殖系数高等特点[ 4 - 7 ]。在组织培养中，外植体选择、消毒药剂种类、消毒方式及消毒时间是影响无菌体系建立的重要因素，初代培养成功与否直接关系到组培苗的成活率。本研究通过对红醋栗不同部位外植体消毒方法的消毒效果的影响研究，为红醋栗的组培快繁提供技术参考。
1 试验地概况
试验地设于辽宁省朝阳市建平县富山镇的良种红醋栗引种栽培基地。该地区为暖温带半湿润、半干旱气候，年均气温5.4～8.7 ℃，年均日照时数2 850～2 950 h，降水量450～580 mm，无霜期120～155天。
2 试验材料与方法
2. 1 试验材料
2020年6月中旬，于试验地采集若干当年生生长发育健壮、无病虫害的红醋栗同株幼嫩茎尖、半木质化茎段和木质化茎段作为外植体试验材料。
2. 2 试验方法
2. 2. 1 材料预处理
将采集回来的外植体剪成8 cm左右的茎段，剪掉叶片。流水冲洗后，用肥皂液浸泡5 min，然后用软毛刷刷掉表面尘土和杂物，用流水冲净肥皂液，置于自来水龙头下冲洗3～4 h后转入无菌室备用。
2. 2. 2 外植体消毒
采用L9（ 34 ）正交试验设计，选取外植体部位、消毒药剂种类、消毒方式及消毒时间这4个因素，每个因素各设3个水平，即外植体部位（幼嫩茎尖、半木质化茎段、木质化茎段），消毒药剂种类（75%酒精30 s+0.1%升汞、0.1%升汞、0.1%升汞+2滴吐温），消毒方式（静止浸泡、玻璃棒搅动、手摇容器晃动），消毒时间（6 min、8 min、10 min）（表1）。将备好的外植体茎段按照试验设计进行消毒处理，用无菌水冲洗5～6次，将冲洗干净、滤干水分的外植体在超净工作台上切成1 cm的带芽茎段，接种到初代培养固体培养基中，每个处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体，30天后统计诱导率。
诱导率（K）=诱导出不定芽的外植体数量/接种的外植体总数×100%
2. 2. 3 培养条件
以MS为基本培养基，附加激素6-BA0.6 mg/L+ IBA0.04 mg/L，活性炭AC1.0 g/L，蔗糖含量为33%，琼脂含量为0.8%，pH值调至5.8，置于121℃、1.1 kg/m2压力下高温灭菌20 min，培养室温度控制在（23±2）℃，空气相对湿度50%～60%，光照强度为2 000～4 000 lx，光照时间为14～16 h/d[ 4 ]。
3 结果与分析
3. 1 不同外植体消毒效果比较
将供试外植体部位按照不同消毒方法设置9个处理（表2）：（1）幼嫩茎尖，75%酒精30 s+0.1%升汞，静止浸泡6 min;（2）幼嫩茎尖，0.1%升汞，玻璃棒搅动8 min;（3）幼嫩茎尖，0.1%升汞+2滴吐温，手摇容器晃动10 min;（4）半木质化茎段，75%酒精30s+0.1%升汞，玻璃棒搅动10 min;（5）半木质化茎段，0.1%升汞，手摇容器晃动6 min;（6）半木质化茎段，0.1%升汞+2滴吐温，静止浸泡8 min;（7）木质化茎段，75%酒精30 s+0.1%升汞，手摇容器晃动8 min;（8）木质化茎段，0.1%升汞，静止浸泡10 min;（9）木质化茎段，0.1%升汞+2滴吐温，玻璃棒搅动6 min。
试验接种后，对组培苗进行观察和调查统计，并将污染的和消毒处理过程中杀死的组培苗及时清出培养室，30天后统计红醋栗离体初代培养的诱导率。由不同外植体消毒方法的正交试验结果（表2）可以看出，试验处理6的相对诱导率较好，为78.6%。
3. 2 数据分析
由各试验处理诱导结果（表3）可以看出，试验处理因素主次顺序是以极差值R的大小来衡量的，试验比较外植体部位对红醋栗离体初代培养成活率的影响最为明显，极差值R为28.0;其次是消毒药剂的种类，R值为10.6;再次是消毒时间和消毒方式，R值分别为9.8和6.5。 注： K为诱导率
4 结论与讨论
4. 1 控制污染、提高成活率是植物组织培养中的关键因素，外植体因其部位不同，细胞活力强弱及带菌多少存在差异，进而影响初代培养的污染程度。使用适宜的消毒药剂，掌握好消毒方式和消毒时间能够起到理想的灭菌作用。
4. 2 75%酒精具有很強的渗透力，不适用于幼嫩茎尖灭菌，而0.1%升汞作为组织培养中常用的消毒剂，结合吐温一起使用，能够促进药液与外植体表面组织接触，消毒效果更好。玻璃棒搅动消毒虽然污染较低，但在搅动过程中很可能对幼嫩外植体表面造成损伤，使药液渗入组织，进而对成活率产生一定影响。
4. 3 在进行红醋栗离体初代培养时，以半木质化茎段为外植体，以0.1%升汞+2滴吐温溶液为消毒药剂，再通过手摇容器晃动的方式消毒8 min的试验效果最佳。
参考文献
[1] 惠兴学. 俄罗斯红醋栗引种栽培技术[J]. 防护林科技， 2007（5）： 122 - 123.
[2] 兰士波. 红醋栗种质资源研究现状与展望[J]. 中国林副特产， 2018（1）： 83 - 86.
[3] 王洪江. 不同处理对红醋栗扦插育苗效果的影响[J]. 辽宁林业科技， 2018（6）： 24 - 26.
[4] 黄立华， 王占龙， 朱虹， 等. 红醋栗组培快繁技术研究[J].辽宁林业科技， 2012（6）： 15 - 17 + 24.
[5] 张海旺， 王洪江. 红醋栗无性繁殖技术研究[J]. 林业科技，2019， 44（5）： 28 - 32.
[6] 王洪江， 张海旺， 白锦曦， 王腊梅. 辽西地区红醋栗无性繁殖关键技术[J]. 辽宁林业科技， 2019（5）： 74 - 75 + 78.
[7] 马艳丽. 红醋栗水培扦插繁殖技术初步研究[J]. 林业科技，
2019， 44（2）： 26 - 27.
第1作者简介： 朱虹（1981-）， 女， 工程师， 主要从事苗木繁育工作。
收稿日期： 2021 - 01 - 16
（责任编辑： 王 岩）