【摘 要】
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目的 分析离体培养的视网膜Müller细胞对透明质酸的降解功能.方法 提取的Müller细胞来自酶降解的猪后极部视网膜.并以3种不同细胞标记:胶质纤维酸性蛋白、波形蛋白、谷氨酰
【机 构】
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南京医科大学附属无锡市人民医院眼科,江苏省无锡市,214000;南京医科大学附属无锡市人民医院中心实验室,江苏省无锡市,214000
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目的 分析离体培养的视网膜Müller细胞对透明质酸的降解功能.方法 提取的Müller细胞来自酶降解的猪后极部视网膜.并以3种不同细胞标记:胶质纤维酸性蛋白、波形蛋白、谷氨酰胺合成酶进行免疫荧光确认.细胞分为4组,其中1组培养液中加入透明质酸,2组培养液中加入透明质酸和抗integrin α1β1抗体,3组培养液中加入透明质酸和抗CD44抗体,4组培养液中未加入其他试剂.细胞预培养后,收集上清液.按配置聚丙烯酰胺凝胶的方法,加入透明质酸,不加入十二烷基硫酸钠制作底物胶.样品在底物胶电泳后,凝胶在酶降解缓冲液中培养24 h,淋洗后以5 g·L-1亮蓝染色、体积分数7%醋酸脱色,观察有无透明质酸降解后形成的脱色条带.结果 93.8%细胞胶质纤维酸性蛋白抗体染色阳性,94.6%细胞波形蛋白抗体染色阳性,88.6%细胞谷氨酰胺合成酶抗体染色阳性.培养的Müller细胞有降解透明质酸的功能,(4组)表现为蓝色背景(透明质酸染色)下的淡白色双条带(透明质酸降解后脱色);将细胞和透明质酸预培养可使脱色条带明显增厚,表现为明亮的白色条块(1组),同时加入透明质酸和integrinα2β1抗体产生相似的白色条块(2组),同时加入透明质酸和CD44抗体使脱色恢复为淡白色双条带(3组).结论 培养的Mülle,细胞有降解透明质酸的功能,细胞与透明质酸的相互作用明显加强细胞降解透明质酸的功能,CD44抗体可能减弱这种加强作用.integrinα2β1抗体无明显作用.
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