【摘 要】
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目的:研究Pleckstrin同原序列富亮氨酸重复片段蛋白磷酸酶(PHLPP2)在急性肾损伤(AKI)发生发展中的作用及机制;方法:将20只野生型C57BL/6(WT)小鼠与20只敲除PHLPP2(PHLPP2-/-)
【机 构】
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海南医学院第一附属医院血液净化科,海口,570102海南医学院基础医学与生命科学学院;
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目的:研究Pleckstrin同原序列富亮氨酸重复片段蛋白磷酸酶(PHLPP2)在急性肾损伤(AKI)发生发展中的作用及机制;方法:将20只野生型C57BL/6(WT)小鼠与20只敲除PHLPP2(PHLPP2-/-)表达的转基因小鼠按是否使用顺铂(CDDP)处理进行分组,即WT对照组、WT CDDP处理组、PHLpp2-/-对照组和PHLPP2-/-CDDP处理组(每组10只).3d后处死小鼠,RT-PCR及Western Blot检测各组小鼠中PHLPP2 mRNA及蛋白水平;免疫组织化学染色检测肾组织PHLPP2表达及定位;HE与TUNEL染色检测肾组织损害和细胞的凋亡情况;分离并鉴定小鼠肾小管上皮细胞(RTECs),透射电子显微镜观察RTECs中线粒体结构;JC-1法检测RTECs中线粒体膜电位变化;Western Blot检测RTECs中促凋亡蛋白Bax、Caspase-3,及凋亡抑制蛋白Bcl-2和Akt的Thr308与Ser473位点磷酸化水平. 结果:CDDP成功诱导AKI模型,肾脏组织中PHLPP2表达显著增加;与WTCDDP组相比,PHLPP2-/-CDDP组小鼠的血尿素氮、血清肌酐明显降低,肾组织结构损害较轻,凋亡细胞减少,线粒体结构损伤减轻,线粒体膜电位下降减少;敲除PHLPP2基因表达可显著促进Bcl-2蛋白表达,而抑制Bax、Caspase-3蛋白表达,且PHLPP2基因通过对Akt的Thr308与Ser473位点去磷酸化而调节上述蛋白表达. 结论:敲除PHLPP2表达能够通过减轻线粒体膜电位的下降,保护线粒体的正常结构及功能,从而通过线粒体途径的凋亡改善AKI损伤.
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