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目的
表达A组轮状病毒疫苗株LLR的VP8*蛋白,为深入研究LLR的功能特性奠定基础。
方法从兰州生物制品所生产的A组轮状病毒疫苗中提取病毒RNA为模板,经过RT-PCR反应获得轮状病毒LLR株VP8*基因的cDNA片段,将其克隆到pGEX-4T1表达载体中构建重组质粒pGEX-4T1-VP8*,测序正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),通过SDS-PAGE电泳、免疫印迹方法检测IPTG诱导表达后的产物,用Glutathione Sepharose 4B纯化目的蛋白。
结果SDS-PAGE电泳可见大小约为52 000的融合蛋白,Western-Blot显示该蛋白能与GST标签抗体结合。
结论成功构建了包含LLR株VP8*序列的重组表达载体pGEX-4T1-VP8*,获得了可溶性GST-VP8*重组蛋白。