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多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是植物体内重要的抗氧化酶,它具有清除活性氧和合成酚类、木质素和植保素等功能,能增强植物抗逆和抵御病虫害能力.课题组前期研究发现丹参PPO基因能正向调控丹酚酸B合成.为深入探究其机制,该文以克隆的丹参多酚氧化酶基因(SmPPO,GenBank登录号KF712274.1)构建了pGBKT7-PPO诱饵载体,验证了其无自激活、无毒性.实验室构建的丹参eDNA文库滴度为4.75×107 cfu·mL-1,符合建库要求.通过酵母双杂交试验筛选出22个可能与SmPPO互作的蛋白.通过酵母共转化验证得到只有PAL1和TAT与SmPPO互作,通过双分子荧光互补检测(BiFC)进行进一步验证,获得只有TAT与SmPPO互作,故确定TAT与SmPPO互作.分别对TAT和SmPPO按照结构域进行截短,获得SmPPO前126个氨基酸和酪氨酸氨基转移酶(TAT)在细胞膜和叶绿体上互作.通过亚细胞定位试验获得SmPPO主要定位于细胞核和细胞膜上;TAT定位于细胞膜上.实时荧光定量PCR结果表明SmPPO基因主要在根和茎中表达;TAT基因在根中表达,茎和花中表达量较低.该文为深入研究丹参SmPPO与TAT互作调控酚类物质合成的分子机制奠定了坚实基础.