【摘 要】
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目的:研究长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)对类风湿关节炎滑膜细胞(MH7A)凋亡的调控作用及其作用机制.方法:运用脂质体将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-HOTAIR组(转染pcDNA-HOTAIR)、antagomiRNA组(转染antagomiRNA)、antagomiR-34a-5p组(转染antagomiR-34a-5p)、pcDNA-HOTAIR+agomiRNA组(共转染pcDNA-HO-TAIR和agomiRNA)、pcDNA-HOTAIR+a
【机 构】
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中国人民解放军联勤保障部队第九二○医院,昆明 650000
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目的:研究长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)对类风湿关节炎滑膜细胞(MH7A)凋亡的调控作用及其作用机制.方法:运用脂质体将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-HOTAIR组(转染pcDNA-HOTAIR)、antagomiRNA组(转染antagomiRNA)、antagomiR-34a-5p组(转染antagomiR-34a-5p)、pcDNA-HOTAIR+agomiRNA组(共转染pcDNA-HO-TAIR和agomiRNA)、pcDNA-HOTAIR+agomiR-34a-5p组(共转染pcDNA-HOTAIR和agomiR-34a-5p)转染进MH7A细胞.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中HOTAIR、miR-34a-5p的表达;流式细胞术、蛋白免疫印迹(Western blot-ting)实验检测细胞凋亡率、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X基因(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性.结果:与HFLS组相比,MH7A组细胞HOTAIR表达升高;过表达HOTAIR后,MH7A细胞的凋亡率降低,凋亡促进蛋白Caspase-3、Bax表达降低,凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);双荧光素酶报告实验显示,HOTAIR与miR-34a-5p之间存在靶向关系.抑制miR-34a-5p后,MH7A细胞具有与过表达HOTAIR相似的抑制细胞凋亡作用.过表达miR-34a-5p部分逆转过表达HOTAIR对MH7A细胞的凋亡抑制作用.结论:LncRNA HOTAIR在RA滑膜细胞中高表达,抑制RA滑膜细胞凋亡,其机制之一为靶向抑制miR-34a-5p.
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