【摘 要】
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家蚕幼虫的翅原基最终发育为成虫的翅,翅原基发育与家蚕的变态发育紧密关联.为了研究激素作用下家蚕翅原基发育的分子调控机制,以经过蜕皮激素20E体外诱导培养和未经诱导培养
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院,广州510642;湖南省蚕桑科学研究所,长沙410127;华南农业大学动物科学学院,广州,510642
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家蚕幼虫的翅原基最终发育为成虫的翅,翅原基发育与家蚕的变态发育紧密关联.为了研究激素作用下家蚕翅原基发育的分子调控机制,以经过蜕皮激素20E体外诱导培养和未经诱导培养的家蚕5龄幼虫翅原基为材料分别提取总蛋白质,利用Shotgun质谱分析在20E诱导组的翅原基中获得132种差异蛋白,在未经20E诱导组的翅原基中获得76种差异蛋白.进一步通过生物信息学技术及GO分类法在20E诱导组的翅原基的差异蛋白中,筛选到1个具有生物调节作用的酶类蛋白基因BmHMGS作为翅原基发育相关的候选基因,设计引物并以上蔟1d的蚕体翅原基总RNA反转录得到的cDNA为模板,克隆了该基因.通过qRT-PCR检测到BmHMGS基因在幼虫5龄1d、上蔟3d、蛹期1d蚕体内的表达量较高,其中在上蔟3d的表达量达到峰值.构建重组载体进行BmHMGS的原核表达并制备抗体后,采用Western blot技术在5龄1～7d和上蔟1～3d的蚕体翅原基、脂肪体中及上蔟1～3d的生殖腺中都可以检测到BmHMGS的表达,并且在翅原基中的表达没有发育时期特异性.研究结果表明,从20E诱导组的家蚕翅原基中鉴定的BmHMGS与翅原基发育相关,其表达在5龄至上蔟阶段没有时期和组织的特异性,推测BmHMGS是一个具有多种生物学功能的基因.
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