【摘 要】
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目的利用CRISPR/Cas9技术构建靶向PTEN的基因编辑质粒,构建PTEN稳定敲除的人子宫内膜腺癌细胞株KLE,并初步探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响。方法设计靶向人PT
【基金项目】
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国家自然科学基金(81770001),辽宁省自然科学基金(20180550132),辽宁省教育厅自然科学类基础项目(JC2019040),辽宁省高等学校基本科研项目(LFWK201725)
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目的利用CRISPR/Cas9技术构建靶向PTEN的基因编辑质粒,构建PTEN稳定敲除的人子宫内膜腺癌细胞株KLE,并初步探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响。方法设计靶向人PTEN基因的sgRNA序列,构建puro-cas9-PTENsgRNA质粒,测序验证;将重组质粒转染人子宫内膜腺癌细胞KLE,嘌呤霉素筛选获得PTEN稳定敲除细胞株;用T7E1酶切实验检测切割效率,Western blotting检测PTEN的蛋白表达水平,并检测细胞自噬相关因子LC3、P62的表达水平,检测细胞活性,探
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