【摘 要】
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目的:利用树突状细胞(DC)胞外体(Ex)的物理特性,探讨基于DC-Ex的大小和密度,用超滤离心法制备DC-Ex的实验方法,以改进传统方法、提高收获效率。方法:选用小鼠树突状细胞株DC2
【机 构】
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第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心; 第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心 陕西西安710038; 陕西西安710038;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30571659;30570086)
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目的:利用树突状细胞(DC)胞外体(Ex)的物理特性,探讨基于DC-Ex的大小和密度,用超滤离心法制备DC-Ex的实验方法,以改进传统方法、提高收获效率。方法:选用小鼠树突状细胞株DC2.4为研究对象,收集细胞培养上清,中空纤维器去除细胞及细胞碎片,Amicon Ultra超滤离心管压缩体积,密度梯度超离心纯化获得DC-Ex提取物。对照组则采用传统的分级分离方法。应用透射电镜进行形态学鉴定,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行检测。结果:DC-Ex提取物超微结构形态及SDS-PAGE带型和文献报道类似,包含有主要的特征性标志物分子MHC-I,MHC-II,CD80和CD86;与分级分离法相比,超滤离心法耗时少,产量和纯度较高。结论:超滤离心法是一种简便高效的提取Ex的方法。
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