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目的
通过Microarray技术寻找环磷酸腺苷(c AMP)表达上调的机制。
方法利用Microarray技术和生物信息分析方法,寻找与初级感觉神经元外周突预损伤促进中枢突损伤修复有关的关键微小RNA(miRNA,miR),并采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术、Western blot技术、免疫组织化学染色、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光、反义miRNA寡核苷酸抑制剂和咯利普兰[磷酸二酯酶4A(PDE4A)抑制剂]等技术进行验证。
结果与对照组比较,预损伤组背根神经节c AMP在各时间均有升高,而后索损伤组与对照组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。预损伤组NF-200累计吸光度值(79 473. 86±2 018. 15)明显高于后索损伤组(89 623. 43±1 984. 69)且差异有统计学意义(P< 0. 05)。与对照组比较预损伤组和后索损伤组共有681个miRNA发生表达变化,预损伤组miR-139-5p在脊髓后索损伤后4 h、3 d和7 d明显上调,而14 d开始下降。与对照组比较预损伤组各时间点PDE4A mRNA表达量差异无统计学意义(P> 0. 05),而PDE4A蛋白含量在脊髓后索损伤后4 h、3 d和7 d下降。培养基中加入AMO-139抑制背根神经节神经元的miR-139-5p后PDE4A蛋白含量较未加入AMO-139的背根神经节神经元高。加入咯利普兰的背根神经节神经元轴突较空白神经元明显延长,而在加入咯利普兰的同时加入AMO-139则轴突长度与空白神经元比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。
结论初级感觉神经元外周突预损伤使miR-139-5p上调,通过抑制PDE4蛋白的表达导致神经元内c AMP含量上升进而促进中枢突损伤修复。