探讨阻断TGF－β/Smads通路的双位点对人皮肤Fb生成瘢痕相关蛋白的影响。

将携带可溶性TGF－β受体Ⅱ(sTβRⅡ)、突变型Smad 4––Smad 4ΔM4基因的2种慢病毒载体按最适感染复数(MOI)50分别转染人皮肤Fb细胞株人包皮Fb 1(HFF－1)细胞，蛋白质印迹法测定2种转染细胞的sTβRⅡ、Smad 4ΔM4蛋白表达情况，并与未转染细胞进行对比。采用随机数字表法将HFF－1细胞分为6组，每组6皿，每皿1×10⁴个。共转染组，将2种病毒按MOI＝50、1∶1混合共转染细胞后用5 ng/mL TGF－β₁刺激72 h；sTβRⅡ组，慢病毒sTβRⅡ取MOI＝50转染细胞，余处理同前；Smad 4ΔM4组，慢病毒Smad 4ΔM4取MOI＝50转染细胞，余处理同前；阴性病毒对照组，空载体病毒转染细胞，余处理同前；阳性对照组，仅用5 ng/mL TGF－β₁刺激72 h；空白对照组，常规培养细胞，不作任何其他处理。刺激结束后，采用蛋白质印迹法、实时荧光定量RT－PCR法分别检测各组细胞纤维连接蛋白的蛋白和mRNA表达，分别采用ELISA法和Sircol法检测各组细胞培养上清液中结缔组织生长因子(CTGF)及总胶原蛋白表达量。对数据行单因素方差分析及SNK－q检验。

(1)慢病毒sTβRⅡ转染的HFF－1细胞sTβRⅡ蛋白表达明显高于未转染的HFF－1细胞，慢病毒Smad 4ΔM4转染的HFF－1细胞Smad 4ΔM4蛋白表达亦明显高于未转染的HFF－1细胞。经验证，2种慢病毒转染的细胞均能有效表达相应的目的蛋白。(2)6组细胞纤维连接蛋白的蛋白及mRNA表达量总体均差异明显(F值分别为53.536和24.365，P值均小于0.001)。阳性对照组细胞纤维连接蛋白的蛋白与mRNA表达量分别为1.60±0.18、1.99±0.40，与阴性病毒对照组的1.60±0.15、1.94±0.28相近(q值分别为0.091和0.419，P值均大于0.05)，但高于其余4组(q值为5.245～18.228，P值均小于0.05)；共转染组细胞纤维连接蛋白的蛋白与mRNA表达量分别为0.60±0.05、0.70±0.11，明显低于sTβRⅡ组的0.89±0.13、1.24±0.17和Smad 4ΔM4组的0.91±0.14、1.28±0.19(q值为3.964～4.294，P值均小于0.05)。(3)6组细胞培养上清液中CTGF及总胶原蛋白表达量总体均差异明显(F值分别为107.680和38.347，P值均小于0.001)。阳性对照组细胞培养上清液中CTGF及总胶原蛋白表达量与阴性病毒对照组相近(q值分别为1.106和0.491，P值均大于0.05)，但明显高于其余4组(q值为6.414～26.420，P值均小于0.05)；共转染组细胞培养上清液中CTGF及总胶原蛋白表达量均明显低于sTβRⅡ组和Smad 4ΔM4组(q值为3.424～7.143，P值均小于0.05)。

在皮肤Fb中，阻断TGF－β/Smads通路双位点在抑制TGF－β₁导致的瘢痕相关蛋白上调方面优于阻断单个位点。