【摘 要】
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目的:构建表达人乳头瘤病毒58型(HPV58)E6E7融合基因的慢病毒颗粒,为构建稳定表达HPV58E6E7融合基因的细胞系奠定基础。方法:将HPV58E6E7融合基因片段插入慢病毒表达载体GV30
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目的:构建表达人乳头瘤病毒58型(HPV58)E6E7融合基因的慢病毒颗粒,为构建稳定表达HPV58E6E7融合基因的细胞系奠定基础。方法:将HPV58E6E7融合基因片段插入慢病毒表达载体GV303中,构建重组慢病毒表达载体GV303-HPV58E6E7。再将得到重组质粒GV303-HPV58E6E7及慢病毒包膜质粒共同转染至293T细胞,使其在细胞内自动包装成携带HPV58E6E7融合基因的慢病毒颗粒,即表达HPV58E6E7融合基因的重组慢病毒LV-HPV58E6E7。并将重组慢病毒LV-HPV58E6E7转染入HPV(-)的人宫颈癌细胞系C33A,实验共分为C33A、C33A/LV-CON和C33A/LV-HPV58E6E7细胞3组,经QRT-PCR及Western bloting检测各组细胞中HPV58E6E7基因和HPV58E6E7+His-tag融合蛋白的表达。结果:LV-CON和LV-HPV58E6E7两种病毒液感染HPV(-)的人宫颈癌C33A细胞的感染效率均在90%以上;C33A组、C33A/LV-CON组及C33A/LV-HPV58E6E7组HPV58E6E7融合基因表达量均值分别为0、0、0.49±0.29,3组间比较差异有统计学意义(P=0.035);C33A/LV-HPV58E6E7细胞的总蛋白中,可见带有HPV58E6E7+His-tag的融合蛋白的条带,而在对照细胞C33A/LV-CON及C33A的总蛋白中,未见上述条带。结论:成功构建表达HPV58E6E7融合基因的重组慢病毒颗粒LV-HPV58E6E7并能实现真核表达,为后续的稳定表达HPV58E6EE7融合基因的细胞系构建及HPV58型相关疫苗的免疫检测奠定了基础。
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