【摘 要】
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扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)因具有较强的α-淀粉酶以及葡聚糖酶活性,使其在以淀粉为唯一碳源的培养基上能够良好的生长。从其基因组中克隆了α-淀粉酶的编码
【机 构】
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中国科学院微生物研究所,中国科学院研究生院
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扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)因具有较强的α-淀粉酶以及葡聚糖酶活性,使其在以淀粉为唯一碳源的培养基上能够良好的生长。从其基因组中克隆了α-淀粉酶的编码区,构建了由酵母磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子、酿酒酵母α-因子信号序列以及扣囊复膜酵母α-淀粉酶基因编码序列组成的基因表达盒。将该表达盒插入到质粒pPLZ-2的ILV2基因序列内部,使其两翼具有ILV2基因的同源区。将该表达盒通过同源重组的方式整合到啤酒酵母工业菌株YSF-5的α-乙酰乳酸合成酶(AHAS)基因ILV2内部。在以淀粉为唯一碳源的培养基上进行转化子的筛选。通过多对引物PCR、α-淀粉酶活性以及AHAS活性分析对转化子进行鉴定,得到一株具有α-淀粉酶分泌表达活性、较低AHAS活性,并且发酵液中双乙酰产量也相对较低的啤酒酵母工程菌。该菌株在非选择压力条件下连续培养50代后仍然保持其遗传稳定性。还对pH、温度以及金属离子对该转化菌株的α-淀粉酶活性的影响进行了研究。由于所构建的菌株不含有非酵母来源的DNA,所以生物安全性相对较高,对酵母育种以及啤酒生产工业都具有较为重要的意义。
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