蛇莓RAPD与ISSR—PCR反应体系优化

来源 :江苏农业科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jzl_root2
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  摘要:采用单因素试验结合正交试验,对PCR反应体系中的5种主要反应因子Mg2 、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA浓度进行优化筛选,确立了适合蛇莓基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系,RAPD反应体系(20 μL):Mg2 1.5 mmol/L、dNTPs 250 μmol/L、Taq酶1 U、引物0.2 μmol/L、DNA模板60 ng;ISSR反应体系(20 μL):Mg2 2.0 mmol/L、dNTPs 250 μmol/L、Taq酶0.5 U、引物1 μmol/L、DNA模板60 ng。利用確立的体系对24份蛇莓种质进行扩增,结果条带清晰明亮,多态性好。 全文查看链接   PCR反应条件中影响最大的是Mg2 、dNTPs与引物的浓度[7],在RAPD-PCR各因素浓度水平互相作用中,高Mg2 、低dNTPs浓度,以及低Mg2 、高dNTPs浓度条件不能扩增出条带或产生极弱的条带,因为dNTPs过早被消耗完,使产物单链化,甚至得不到产物;而过量的dNTPs对Mg2 的螯合作用明显,从而降低了依赖于Mg2 的TaqDNA聚合酶的活性,也不能扩增出条带[8-10];而在ISSR-PCR中,Mg2 浓度太低时,不管引物和dNTPs浓度如何,均不能成功扩增,表明了Mg2 在扩增中的重要性。 全文查看链接
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摘要双齿锤角叶蜂(Odontocimbex svenhedini Malaise)是近年发生于甘肃天水刺五加(Acanthopanax senticosus)的一种食叶新害虫,其寄主刺五加是首次报道。该虫1年发生1代,翌年4月上旬越冬预蛹开始化蛹,4月中旬成虫羽化,下旬开始产卵,卵产于叶背面或正面主脉周围叶表皮下,卵期9~11 d;幼虫食叶为害,共5龄,6月上旬至7月中旬为猖獗为害期,6月下旬幼虫
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